 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 生物信息 » 蛋白質純化與結晶的原理
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 579 | 回復: 0 | |||
[交流]
蛋白質純化與結晶的原理
|
|
獲得蛋白質的晶體結構的第一個瓶頸，就是制備大量純化的蛋白質（>10mg），其濃度通常在10mg/ml以上，并以此為基礎進行結晶條件的篩選。運用重組基因的技術，將特定基因以選殖（clone）的方式嵌入表現載體（expression vector）內，此一載體通常具有易于調控的特性。之后再將帶有特定基因的載體送入可快速生長的菌體中，如大腸桿菌（Escherichia coli），在菌體快速生長的同時，也大量生產表現載體上的基因所解譯出之蛋白質。一般而言純度越高的蛋白質比較有機會形成晶體，因此純化蛋白質的步驟就成為一個重要的決定因素。 在取得高純度的蛋白質溶液后，接下來就是晶體的培養(yǎng)。蛋白質晶體與其他化合物晶體的形成類似，是在飽和溶液中慢慢產生的，每一種蛋白質養(yǎng)晶的條件皆有所差異，影響晶體形成的變量很多，包含化學上的變量，如酸堿度、沉淀劑種類、離子濃度、蛋白質濃度等；物理上的變數，如溶液達成過飽和狀態(tài)的速率、溫度等；及生化上的變數，如蛋白質所需的金屬離子或抑制劑、蛋白質的聚合狀態(tài)、等電點等，皆是養(yǎng)晶時的測試條件。截至目前為止，并無一套理論可以預測結晶的條件，所以必須不斷測試各種養(yǎng)晶溶液的組合后，才可能得到一顆完美的單一晶體。 蛋白質晶體的培養(yǎng)，通常是利用氣相擴散法（Vapor Diffusion Method）的原理來達成；也就是將含有高濃度的蛋白質（10～50mg/ml）溶液加入適當的溶劑，慢慢降低蛋白質的溶解度，使其接近自發(fā)性的沈淀狀態(tài)時，蛋白質分子將在整齊的堆棧下形成晶體。舉例來說，我們將蛋白質溶于低濃度（~1.0M）的硫酸銨溶液中，將它放置于一密閉含有高濃度（~2.0M）硫酸銨溶液的容器中，由氣相平衡，可以緩慢提高蛋白質溶液中硫酸銨的濃度，進而達成結晶的目的。 蛋白質晶體在外觀上與其他晶體并無明顯不同之處，但在晶體的內部，卻有很大的差異。一般而言，蛋白質晶體除了蛋白質分子外，其他的空間則充滿約40%至60%之間的水溶液，其液態(tài)的成分不僅使晶體易碎，也容易使蛋白質分子在晶格排列上有不規(guī)則的情形出現，造成晶體處理時的困難及繞射數據上的搜集不易等缺點。但也由于高含水量的特性，讓蛋白質分子在晶體內與水溶液中的狀態(tài)，極為相似。所以由晶體所解出的蛋白質結構，基本上可視為自然狀態(tài)下的結構。 |
回復此樓» 猜你喜歡
推薦一些20種氨基酸檢測的實際應用案例
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經有240人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經有0人回復
-
蛋白質檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經有0人回復
-
納米粒度分析
已經有3人回復
» 本主題相關商家推薦: (我也要在這里推廣)
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 百事可愛66 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 266求調劑 +5 | 哇塞王帥 2026-03-03 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 293求調劑 +4 | 是樂渝哇 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
[考研] 0703 總分319求調劑 +4 | Xinyuu 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 中國林科院林化所（南京）2026年招收化學/材料/環(huán)境工程等背景碩士研究生3名 +3 | realstar2006 2026-02-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 298求調劑一志愿中海洋 +3 | lour. 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 283求調劑 +9 | 鹿沫笙 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿天津大學085600 319分 材料與化工 金屬方向 求調劑 +4 | 青科11 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 計算機學碩 分數285求調劑
+4
|
glwshine 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 沒上岸的看過來 +3 | tangxiaotian 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0857調劑 +6 | 一ll半 2026-02-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 【2026 碩士調劑】課題組 招收調劑生 +3 | 考研版棒棒 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 291 求調劑 +3 | 化工2026屆畢業(yè)?/a> 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 284求調劑 +10 | 天下熯 2026-02-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 化工專碩342，一志愿大連理工大學，求調劑 +6 | kyf化工 2026-02-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料學調劑 +10 | 提神豆沙包 2026-02-28 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 322求調劑 +3 | 熊境喆 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 272求調劑 +6 | 田智友 2026-02-28 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 化工299分求調劑 一志愿985落榜 +5 | 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 295復試調劑 +3 | 簡木ChuFront 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 調劑 +3 | 簡木ChuFront 2026-02-28 | 3/150 |
|