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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 材料區(qū) » 生物材料 » 綜合其他 » 熒光共振能量轉移（FRET）
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Sh畢合生物
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[交流]
熒光共振能量轉移（FRET）
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一、活細胞研究遇到的問題： 蛋白質或其他分子在活細胞內互相結合的時間和地點是了解它們功能的關鍵問題。要回答這一問題，需將蛋白質標上不同的熒光團。但是，光學顯微鏡的分辨率將蛋白質檢測精度限制在大約0.2μm左右。要研究蛋白質成分的相互物理作用，需要高的分辨率。 二、什么是FRET？ FRET就是采用非放射方法，在供體和受體相互靠得很近（1-10 nm）時，將光子能從一個受激發(fā)的熒光團（供體）轉移到另一個熒光團（受體）。 采用FRET，可以解決超過光學顯微鏡分辨率限制的分子相對鄰近度問題，來顯示（例如）（1）二個蛋白質成分間分子相互作用；（2）一個分子內部（如酶活動能力、DNA/RNA形態(tài)）的結構變化；（3）采用象CFP-YFP Cameleon這樣特別的FRET-工具的離子濃度 CFP受光激發(fā)后便發(fā)射光 CFP受光激發(fā)后但沒有發(fā)射小光。 CFP離YFP的距離大于10nm CFP與YFP非常接近（1-10 nm） YFP沒有受到激發(fā)，因此也不發(fā)射光 CFP沒有受光激發(fā)，但發(fā)射光 三、FRET原理 受激發(fā)后的熒光團（供體）將受激發(fā)的靜能轉移到一個光吸收分子（受體）。這種能的轉移是非放射性的，其主要原因是供體和受體之間的偶極-偶極間的相互作用。通過雙偶極反應，一個處于激發(fā)態(tài)的供體以非激發(fā)方式將能量傳遞給旁邊的受體。 這一理論基于將被激發(fā)熒光分子看成振蕩偶極子，能夠和有同一震蕩頻率的另一個偶極子發(fā)生能量交換。 只有幾個熒光團對才適合FRET實驗，因為，除了其他必要條件（如偶極子定向、足夠的熒光壽命），供體放射光譜必須將受體的激發(fā)光譜重疊起來。已知的FRET對是CFP/YFP、BFP/GFP、GFP/諾丹明、FITC/Cy3 作者：畢合生物 公眾號：畢合生物 畢合生物提供服務內容：分子生物學、免疫, 重組蛋白及ELISA相關、活性小分子化合物、高端化學、材料化學、細胞資源庫與培養(yǎng)相關、生命科學、天然產物 |
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