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Sh畢合生物
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[交流]
熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)
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一、活細(xì)胞研究遇到的問題: 蛋白質(zhì)或其他分子在活細(xì)胞內(nèi)互相結(jié)合的時(shí)間和地點(diǎn)是了解它們功能的關(guān)鍵問題。要回答這一問題,需將蛋白質(zhì)標(biāo)上不同的熒光團(tuán)。但是,光學(xué)顯微鏡的分辨率將蛋白質(zhì)檢測(cè)精度限制在大約0.2μm左右。要研究蛋白質(zhì)成分的相互物理作用,需要高的分辨率。 二、什么是FRET? FRET就是采用非放射方法,在供體和受體相互靠得很近(1-10 nm)時(shí),將光子能從一個(gè)受激發(fā)的熒光團(tuán)(供體)轉(zhuǎn)移到另一個(gè)熒光團(tuán)(受體)。 采用FRET,可以解決超過光學(xué)顯微鏡分辨率限制的分子相對(duì)鄰近度問題,來顯示(例如)(1)二個(gè)蛋白質(zhì)成分間分子相互作用;(2)一個(gè)分子內(nèi)部(如酶活動(dòng)能力、DNA/RNA形態(tài))的結(jié)構(gòu)變化;(3)采用象CFP-YFP Cameleon這樣特別的FRET-工具的離子濃度 CFP受光激發(fā)后便發(fā)射光 CFP受光激發(fā)后但沒有發(fā)射小光。 CFP離YFP的距離大于10nm CFP與YFP非常接近(1-10 nm) YFP沒有受到激發(fā),因此也不發(fā)射光 CFP沒有受光激發(fā),但發(fā)射光 三、FRET原理 受激發(fā)后的熒光團(tuán)(供體)將受激發(fā)的靜能轉(zhuǎn)移到一個(gè)光吸收分子(受體)。這種能的轉(zhuǎn)移是非放射性的,其主要原因是供體和受體之間的偶極-偶極間的相互作用。通過雙偶極反應(yīng),一個(gè)處于激發(fā)態(tài)的供體以非激發(fā)方式將能量傳遞給旁邊的受體。 這一理論基于將被激發(fā)熒光分子看成振蕩偶極子,能夠和有同一震蕩頻率的另一個(gè)偶極子發(fā)生能量交換。 只有幾個(gè)熒光團(tuán)對(duì)才適合FRET實(shí)驗(yàn),因?yàn),除了其他必要條件(如偶極子定向、足夠的熒光壽命),供體放射光譜必須將受體的激發(fā)光譜重疊起來。已知的FRET對(duì)是CFP/YFP、BFP/GFP、GFP/諾丹明、FITC/Cy3 作者:畢合生物 公眾號(hào):畢合生物 畢合生物提供服務(wù)內(nèi)容:分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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