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牛膩流利新蟲 (小有名氣)
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[求助]
質(zhì)粒靈敏度跑不出來 已有1人參與
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合成的含病毒目的片段的質(zhì)粒搖菌后提取跑QPCR,10倍倍比稀釋,第一次跑第一個(gè)濃度(2*10的7次方)ct值有16;第二次第三次跑就到17~18,導(dǎo)致靈敏度(2*10的1次方)ct值高于38不合格。 質(zhì)粒不是很穩(wěn)定嗎,第一次跑完了也是-20度凍存的。 第二、三次和第一次的區(qū)別就是第一次用96孔板和RNase-free水稀釋質(zhì)粒標(biāo)曲,第二、三次用的八連管和專門的dilution稀釋標(biāo)曲,但是這些差別應(yīng)該不是問題所在吧。 |
新蟲 (知名作家)
新蟲 (小有名氣)
鐵蟲 (初入文壇)
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反復(fù)凍熔會導(dǎo)致質(zhì)粒降解,如果是一周內(nèi)使用,放在四度完全沒有問題。另外做標(biāo)曲的時(shí)候,建議十倍梯度稀釋,按理說,你引物探針擴(kuò)增效率還行的話,10*7 cp/mL跑到16、17,10*3 cp/mL會在34-36左右,每稀釋一個(gè)數(shù)量級,CT值后延3.2左右才是正常的。希望對你有幫助。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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