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牛膩流利新蟲 (小有名氣)
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[求助]
質(zhì)粒靈敏度跑不出來 已有1人參與
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合成的含病毒目的片段的質(zhì)粒搖菌后提取跑QPCR，10倍倍比稀釋，第一次跑第一個濃度（2*10的7次方）ct值有16；第二次第三次跑就到17~18，導(dǎo)致靈敏度（2*10的1次方）ct值高于38不合格。 質(zhì)粒不是很穩(wěn)定嗎，第一次跑完了也是-20度凍存的。 第二、三次和第一次的區(qū)別就是第一次用96孔板和RNase-free水稀釋質(zhì)粒標(biāo)曲，第二、三次用的八連管和專門的dilution稀釋標(biāo)曲，但是這些差別應(yīng)該不是問題所在吧。 |
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一點也不簡單
新蟲 (知名作家)
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2樓2023-05-11 18:10:32
3樓2023-05-12 17:11:50
牛膩流利
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4樓2023-05-25 16:28:29
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反復(fù)凍熔會導(dǎo)致質(zhì)粒降解，如果是一周內(nèi)使用，放在四度完全沒有問題。另外做標(biāo)曲的時候，建議十倍梯度稀釋，按理說，你引物探針擴增效率還行的話，10*7 cp/mL跑到16、17，10*3 cp/mL會在34-36左右，每稀釋一個數(shù)量級，CT值后延3.2左右才是正常的。希望對你有幫助。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2023-06-08 15:08:23
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