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zljg8260新蟲 (小有名氣)
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[交流]
為什么我的融合PCR總是失敗 已有2人參與
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各位大佬，有人知道融合PCR具體怎么做好嗎，重疊部分大概多長(zhǎng)合適，然后兩條模板的量大概要加多少，比如50ul體系，200ng/ul的1000bp的模板應(yīng)該加多少，預(yù)反應(yīng)的話有什么注意的 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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A和B片段我一般overlap 30 bp，50ul體系各加200ng，不加引物，PCR 10個(gè)循環(huán)，之后取2ul做模板，各加1.5ul上下游引物，進(jìn)行PCR 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
2樓2023-04-25 23:16:04
Glenice Y
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這個(gè)實(shí)驗(yàn)要注意的細(xì)節(jié)很多，尤其是同源臂的設(shè)計(jì)長(zhǎng)度，一般我是按照1:1加 這時(shí)候你要按照長(zhǎng)度計(jì)算，加入量的確定，其實(shí)一般很少的量就可以了10ng這樣子 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2023-04-25 23:56:41
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4樓2023-04-26 00:12:16
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我兩邊各20，所以有40的同源臂，加的量的話確實(shí)按摩爾比一比一來的，但加的挺多，50ul體系加了有一千多ng1000bp的片段 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2023-04-26 00:14:47
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6樓2023-04-26 21:03:16
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