 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1500 | 回復(fù): 0 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
28968058wj新蟲 (小有名氣)
|
[交流]
細(xì)胞實(shí)驗(yàn) | 巨噬細(xì)胞的提取和分離方法之實(shí)踐篇
|
||
|
原理 · 巨噬細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要細(xì)胞成分，具有抗感染、抗腫瘤和參與免疫應(yīng)答、免疫調(diào)節(jié)等生物學(xué)功能。腹腔巨噬細(xì)胞多游離存在于腹水中易于獲得。因此，可以通過(guò)向小鼠腹腔內(nèi)注射刺激物制造無(wú)菌炎癥環(huán)境以積聚巨噬細(xì)胞，來(lái)進(jìn)行巨噬細(xì)胞研究。以下為具體實(shí)驗(yàn)方案。 · 檢測(cè)步驟 · 01 材料 昆明小鼠，SPF級(jí)，體質(zhì)量18～22 g，雄性，6～8周齡。 02 肉湯制備 6%淀粉肉湯制備 將1.0g胰蛋白胨、0.3g牛肉浸膏和0.5g氯化鈉放入盛有100 mL雙蒸水的燒杯中，置于磁力攪拌器常溫溶解后121℃滅菌30min，于4℃保存。 3%巰基乙酸鹽肉湯的制備 1L雙蒸水中加入29g巰基乙酸鹽，煮沸使其完全溶解，玻璃瓶或離心管分裝后121℃滅菌15min，4℃保存，使用前確保已經(jīng)冷卻。 03 巨噬細(xì)胞的誘導(dǎo) 每次腹腔注射3%巰基乙酸鹽肉湯1mL，每天1次，3d后用預(yù)冷PBS灌洗腹腔2次。 04 巨噬細(xì)胞的收集 準(zhǔn)備75%乙醇，以脫頸方式處死小鼠，浸泡3min。取出，置于無(wú)菌操作臺(tái)，仰臥位固定小鼠，右手持注射器于右下腹部將針頭刺入皮下進(jìn)入腹腔，將5mL預(yù)冷的PBS(培養(yǎng)液組為5mL預(yù)冷的10%血清ＲPMI 1640培養(yǎng)液) 注入腹腔，按摩小鼠腹部5min。無(wú)菌條件下剪開小鼠腹部皮膚顯露胸腹部，用無(wú)菌止血鉗提起劍突處組織，無(wú)菌剪刀在該處剪開約1mm2小口。注意止血鉗保持提起狀態(tài)，用無(wú)菌巴氏吸管從腹腔開口深入腹腔，反復(fù)沖洗腹膜腔灌洗液2次，可回收約8mL 淡黃色灌洗液。 05 巨噬細(xì)胞的純化與培養(yǎng) 將每只小鼠的灌洗液于常溫條件下1000r /min 離心10min，所得細(xì)胞沉淀用ＲPMI 1640培養(yǎng)液重懸接種，培養(yǎng)體系于37℃靜置培養(yǎng)2～3h后洗去未貼壁細(xì)胞，余下的貼壁細(xì)胞即為巨噬細(xì)胞。 06 巨噬細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察及計(jì)數(shù) 細(xì)胞貼壁培養(yǎng)24h后在倒置顯微鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)。用0.5%胰酶消化細(xì)胞，離心棄上清液，PBS重懸得到細(xì)胞懸液，用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)每只小鼠腹腔中分離的巨噬細(xì)胞數(shù)量。 07 臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)巨噬細(xì)胞活性 將500μL“1.6中”的各組巨噬細(xì)胞懸液和500μL臺(tái)盼藍(lán)染液(0.4%濃度) 加入3.5cm培養(yǎng)皿，搖勻后靜置3～8min; 吸取1滴混合液滴入載玻片，3min內(nèi)鏡下計(jì)數(shù)巨噬細(xì)胞200個(gè)，分別統(tǒng)計(jì)活/死細(xì)胞數(shù)目(死細(xì)胞呈藍(lán)色，活細(xì)胞無(wú)色透亮) ; 細(xì)胞活性(%) = 活細(xì)胞數(shù)/200×100%。每組檢測(cè)重復(fù)3次。 · 注意事項(xiàng) · 小鼠腹腔注射刺激物時(shí)不要刺破內(nèi)臟，可以在操作過(guò)程中將小鼠頭部向下抓取，使其腹部?jī)?nèi)容物滑向膈下以避開注射器針頭; 若回收的小鼠腹腔灌洗液過(guò)少，可另外注入預(yù)冷的PBS重復(fù)灌洗；若不小心致腹腔出血，可在腹腔液離心后重懸時(shí)加入5倍細(xì)胞懸液體積的紅細(xì)胞裂解液，再次離心棄上層紅色液體。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
求助生命科學(xué)插圖從入門到精通書籍素材
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
“湖北工業(yè)大學(xué)生物命科學(xué)與健康工程學(xué)院”考博復(fù)習(xí)資料
已經(jīng)有1人回復(fù)
-
急重癥醫(yī)學(xué)/創(chuàng)傷/燒傷/整形論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有133人回復(fù)
-
求助ATCC菌株基因組數(shù)據(jù)
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
水凝膠微針
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
求調(diào)劑，基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)類都可以，英語(yǔ)已過(guò)六級(jí)，有科研經(jīng)歷
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
305臨床醫(yī)學(xué)，求調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
中山大學(xué)“生物醫(yī)學(xué)傳感檢測(cè)及微流控技術(shù)“團(tuán)隊(duì)招博士生 -深圳光明
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
國(guó)家納米科學(xué)中心招收2026年中國(guó)-丹麥聯(lián)合培養(yǎng)博士研究生
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 28968058wj 的主題更新
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 276求調(diào)劑 +8 | 路lyh123 2026-02-28 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 江蘇省農(nóng)科院招調(diào)劑1名 +5 | Qwertyuop 2026-03-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085602化學(xué)工程350，調(diào)劑，有沒(méi)有211的 +5 | 利好利好. 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 成績(jī)276，專業(yè)代碼0856求調(diào)劑 +7 | 小陳朵 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研]
材料工程專碩283求調(diào)劑
 5+8
|
，��？ 2026-03-02 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料工程求調(diào)劑 +3 | 1431251 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料類考研調(diào)劑 +6 | gemmgemm 2026-03-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 化工京區(qū)271求調(diào)劑 +7 | 11ing 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0854復(fù)試調(diào)劑 276 +5 | wmm9 2026-03-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0856調(diào)劑 +10 | 劉夢(mèng)微 2026-02-28 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 0856材料與化工，270求調(diào)劑 +11 | YXCT 2026-03-01 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 085600求調(diào)劑 +4 | LRZZZZZZ 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料復(fù)試調(diào)劑 +5 | 學(xué)材料的點(diǎn) 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +7 | 明遠(yuǎn)求學(xué) 2026-03-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +8 | yang婷 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +5 | 2026計(jì)算機(jī)_誠(chéng)心 2026-03-01 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +10 | 天下熯 2026-02-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +3 | L-xin? 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +3 | aaadim 2026-03-01 | 5/250 |
|
|
|
[論文投稿]
Optics letters投稿被拒求助
30+3
|
luckyry 2026-02-26 | 4/200 |
|