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tchv8378新蟲 (小有名氣)
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[求助]
酶切拖帶和切不開的現(xiàn)象 已有2人參與
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求助，我在用PCR的擴(kuò)增液做單酶切，之前做的好好的沒什么問題，最近發(fā)現(xiàn)按照之前完全相同的流程酶切切不開或者切開有拖帶的現(xiàn)象。我開封了新的引物，新的內(nèi)切酶，延長了酶切時(shí)間，減小了點(diǎn)樣時(shí)擴(kuò)增液的點(diǎn)樣量，重新提了DNA，將buffer（10x）的含量提升到了酶切體系的1/10，酶切時(shí)間從2小時(shí)、4小時(shí)到過夜都有嘗試過但還是沒有達(dá)到之前的水平。 請(qǐng)問大佬還有其他什么原因嗎？萬分感謝！ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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tchv8378
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我也是按照之前的電壓和膠濃度跑的，電泳液也是新配的。下一步我想除了排除氣溶膠之外，試試用3%的膠，100v電壓多跑一會(huì)兒（之前用的2%的，電泳120v 45min-1h）。 鏈接: https://pan.baidu.com/s/1_QWukaB_V9Mav23MLQCecg 提取碼: 364r |
7樓2022-09-19 17:45:06
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換一個(gè)工程菌 我之前是驗(yàn)證保了兩株100測(cè)序正確的 其中一株怎么切怎么換，單酶切體系都有兩個(gè)條帶。直到我換了另一株立馬沒問題了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2022-09-18 18:34:04
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1.工程菌污染 2.實(shí)驗(yàn)室氣溶膠污染~換個(gè)實(shí)驗(yàn)室換套槍做實(shí)驗(yàn) 把這些問題排除下 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2022-09-18 18:36:06
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4樓2022-09-18 20:51:51
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