 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 851 | 回復(fù): 7 | |||
| 【懸賞金幣】回答本帖問題，作者draxlx將贈送您 30 個金幣 | |||
draxlx新蟲 (小有名氣)
|
[求助]
構(gòu)建且成功表達過的重組質(zhì)粒 復(fù)測數(shù)據(jù)時不表達了 已有1人參與
|
||
|
各位大佬，誠心求助。 4月份的時候，我用無縫克隆技術(shù)構(gòu)建了一個 "目的基因+耐熱基因+表達載體" 的重組質(zhì)粒 ，成功表達了“目的基因+耐熱基因”的融合蛋白，測其酶學(xué)特性顯示 ：融合蛋白比野生酶在溫度穩(wěn)定性方面有了極大改善。 現(xiàn)在7月份，我用當(dāng)初保藏的菌種 再次擴培、破胞、純化，復(fù)測其溫度穩(wěn)定性，發(fā)現(xiàn)與野生酶一樣，重復(fù)不出當(dāng)初的數(shù)據(jù)。 跑過菌液電泳，確實是重組質(zhì)粒的菌液沒有拿錯。 又跑了蛋白膠，結(jié)果沒有融合蛋白的表達條帶，反而有野生酶的表達條帶。（怪不得復(fù)測的時候，融合蛋白與野生酶的數(shù)據(jù)幾乎一模一樣，差別十分微�。� 有沒有朋友出現(xiàn)過這種情況��？ （4月份所測的數(shù)據(jù)是沒有錯的，因為當(dāng)時短時間內(nèi)有3個人都測了，三個人測出來的數(shù)據(jù)是高度統(tǒng)一的。） |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有50人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
2樓2022-07-29 13:03:58
pennchem
專家顧問 (正式寫手)
-
專家經(jīng)驗: +21 - MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 297 (大學(xué)生)
- 金幣: 10476
- 散金: 65
- 紅花: 28
- 帖子: 596
- 在線: 1101小時
- 蟲號: 2139205
- 注冊: 2012-11-21
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)
3樓2022-07-29 16:46:09
draxlx
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 192
- 散金: 20
- 帖子: 63
- 在線: 2.5小時
- 蟲號: 29159617
- 注冊: 2022-03-15
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
|
謝謝您的回答。 已經(jīng)試過將當(dāng)初保存的質(zhì)粒重新轉(zhuǎn)化后表達，蛋白膠結(jié)果顯示有融合蛋白條帶出現(xiàn)，但是表達量非常小，且依舊有本不該出現(xiàn)的野生酶表達條帶。 現(xiàn)在準(zhǔn)備重新再構(gòu)建一次質(zhì)粒試試。 菌液電泳跑的是質(zhì)粒電泳。我現(xiàn)在不明白的主要是 為什么野生酶依舊有表達呢，當(dāng)初構(gòu)建重組質(zhì)粒的時候用的是無縫克隆，終止密碼子、酶切位點等全都去掉了，將兩個基因“無縫”地連在一起，如果是蛋白表達有問題，那也應(yīng)該是全部不表達。 |
4樓2022-07-31 13:39:34
draxlx
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 192
- 散金: 20
- 帖子: 63
- 在線: 2.5小時
- 蟲號: 29159617
- 注冊: 2022-03-15
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
5樓2022-07-31 13:42:25
6樓2022-07-31 14:21:01
draxlx
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 192
- 散金: 20
- 帖子: 63
- 在線: 2.5小時
- 蟲號: 29159617
- 注冊: 2022-03-15
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
7樓2022-07-31 16:09:28
pennchem
專家顧問 (正式寫手)
-
專家經(jīng)驗: +21 - MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 297 (大學(xué)生)
- 金幣: 10476
- 散金: 65
- 紅花: 28
- 帖子: 596
- 在線: 1101小時
- 蟲號: 2139205
- 注冊: 2012-11-21
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)
8樓2022-07-31 17:05:45
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 draxlx 的主題更新
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0857 資源與環(huán)境 285分 +5 | 未名考生 2026-03-09 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[基金申請] 第二個面上項目的獲批幾率如何？ +5 | wawm9296 2026-03-04 | 7/350 |
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +3 | Vv呀！ 2026-03-10 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿：武漢理工，材料工程，英二數(shù)二 總分314 +3 | 2202020125 2026-03-10 | 4/200 |
|
|
|
[基金申請]
PDF在線壓縮軟件
 10+3
|
haxia 2026-03-08 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0703求調(diào)劑 +10 | c297914 2026-03-06 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +4 | Xinyu Wu311 2026-03-09 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0856材料與化工290求調(diào)劑 +7 | Nebulala 2026-03-08 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 290 材料與化工求調(diào)劑 +7 | Nebulala 2026-03-08 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +3 | 胡達靈 2026-03-05 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +7 | ounce. 2026-03-05 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 085701環(huán)境工程317分求調(diào)劑 +9 | 6汆尼9 2026-03-07 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料化工求調(diào)劑 +7 | 博斯特525 2026-03-06 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭大071000分數(shù)282求調(diào)劑 +3 | 研研顏 2026-03-05 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +5 | 一二LV 2026-03-07 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 2026調(diào)劑】考試A區(qū)0703化學(xué)類323分 誠求接收 +3 | 卷柏卷柏 2026-03-05 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 085600材料與化工 292分 求調(diào)劑
+6
|
程晴之 2026-03-06 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +7 | 倘若起風(fēng)了呢 2026-03-05 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 考研282分求調(diào)劑，接受跨專業(yè) +4 | 劉淄博 2026-03-04 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 紡織、生物、化學(xué)、材料等專業(yè) +3 | Eember. 2026-03-05 | 7/350 |
|