 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1193 | 回復: 0 | |||
| 【懸賞金幣】回答本帖問題，作者金色海豚將贈送您 500 個金幣 | |||
金色海豚金蟲 (小有名氣)
|
[求助]
乳桿菌的電轉化------跪求大神指導�。�！
|
||
|
乳桿菌電轉化-----跪求大神指導�。�！ 將重組質粒電轉到植物乳桿菌以后，培養(yǎng)了4-5天，平板上只長了一個菌落（但感受態(tài)在抗性平板上隔了一天才長的，長得很多），我P了但沒有P出來條帶，是沒轉進去嗎？（電轉時間是2ms左右，質粒是2ul+50ul感受態(tài)）。感受態(tài)是野生菌株，是自己制備的。質粒濃度是200ng/ul。我聽說3-5ms說明轉化效率比較好，我這個是不是時間太短了啊，或者會是感受態(tài)制備有問題嗎？拜托大家?guī)兔Ψ治鱿略虬?img src="https://muchongimg.xmcimg.com/data/emuch_bbs_images/smilies/cry.gif" align="absmiddle" border="0">  乳桿菌感受態(tài)制備流程如下： 將凍存的植物乳桿菌劃MRS平板復蘇，挑取單個菌落在MRS液體培養(yǎng)輩中30℃培養(yǎng)過夜，以1：100的比例接入50 mL新的MRS液體培養(yǎng)基30℃培養(yǎng)，監(jiān)測0D500至0.3-0.4，迅速置冰上冷卻，4℃ 6000×g離心20 min，棄上清；用50 mL預冷的0.5M庶糖、10%甘油溶液重懸菌體，4℃ 6000×g離心20min，棄上清；用25mL預冷的0.5M庶糖、10%甘油、50mM EDTA溶液重懸菌體，4℃ 6000×g離心15min，棄上清；再用15 mL預冷的0.5M庶糖、10%甘油溶液重懸菌體，4℃ 6000X g離心15 min，棄上清；最后用500 µL預冷的0.5M庶糖、10%甘油溶液重懸菌體，即為植物乳桿菌感受態(tài)細胞，50µL每管分裝，-80℃保存?zhèn)溆谩?br /> 電轉過程如下： 取2ul重組質粒加入50ul上述制備好的植物乳桿菌感受態(tài)，輕輕混勻；將以上混合物轉入冰預冷的2mm電激杯，迅速給予一個單脈沖，參數(shù)設置為2kV，25 F，200Q, 電擊后立即輕柔加入1mL冰預冷的恢復培養(yǎng)基MRS培養(yǎng)基，將菌液全部吸入一滅菌離心管，蓋緊管蓋，冰浴5min 后30℃靜置培養(yǎng)2h；將l00µL菌液涂布于含有5ug/ml的紅霉素MRS平板上，37℃靜置培養(yǎng)1-2天。 |
回復此樓» 猜你喜歡
0856化工原理
已經(jīng)有5人回復
-
289求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復
-
材料與化工085600調(diào)劑求老師收留
已經(jīng)有4人回復
-
301求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復
-
（081700）化學工程與技術-298分求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復
-
售SCI一區(qū)T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齊全,可+急
已經(jīng)有8人回復
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復
-
一志愿中科大材料與化工。353分能調(diào)劑到哪？
已經(jīng)有7人回復
-
337一志愿華南理工0805材料求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復
-
伙伴們，祝我生日快樂吧
已經(jīng)有4人回復
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 金色海豚 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[文學芳草園] 伙伴們，祝我生日快樂吧 +3 | myrtle 2026-03-10 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 泣血叩求調(diào)劑恩，愿以丹心報師恩 +5 | Iuruoh 2026-03-11 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +3 | 柯淮然 2026-03-10 | 8/400 |
|
|
[考研] 一志愿河海大學085900土木水利專碩279求調(diào)劑不挑專業(yè) +3 | SunWwWwWw 2026-03-10 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 081200計算機科學與技術數(shù)一英一306求調(diào)劑 +3 | intankt 2026-03-08 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 標題:撿漏預警|08工科/09農(nóng)學調(diào)劑!英語要求低，過線即有機會! +7 | 馬超放煙花 2026-03-07 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 086000生物與醫(yī)藥319分求調(diào)劑 +4 | Tolkien 2026-03-07 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 313分生物學求調(diào)劑 +5 | Yyt楊1 2026-03-09 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑！ +3 | 朔朔話 2026-03-09 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學調(diào)劑 +3 | 三dd. 2026-03-10 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿天大化工（085600）調(diào)劑總分338 +5 | 蔡大美女 2026-03-09 | 5/250 |
|
|
|
[考博] 找博導 +4 | 小呆呆熊 2026-03-07 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 310 070300化學求調(diào)劑 +4 | 撲風鈴的貓 2026-03-08 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 290 材料與化工求調(diào)劑 +7 | Nebulala 2026-03-08 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0701-322 求調(diào)劑 +3 | jiliuxian 2026-03-06 | 8/400 |
|
|
|
[考研]
 化學工程與技術316求調(diào)劑
+7
|
Sixuan wang 2026-03-06 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料科學（0805）338 求調(diào)劑 +7 | xiaokang3286 2026-03-07 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈爾濱工業(yè)大學0856材料與化工，前三科206，總分283，求調(diào)劑 +7 | 26考研求調(diào)劑 2026-03-06 | 7/350 |
|
|
|
[考研]
085600材料與化工 292分 求調(diào)劑
+6
|
程晴之 2026-03-06 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料與化工304求調(diào)劑 +7 | 邱gl 2026-03-05 | 10/500 |
|