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金色海豚金蟲 (小有名氣)
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乳桿菌的電轉(zhuǎn)化------跪求大神指導(dǎo)�。。�
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乳桿菌電轉(zhuǎn)化-----跪求大神指導(dǎo)�。�！ 將重組質(zhì)粒電轉(zhuǎn)到植物乳桿菌以后，培養(yǎng)了4-5天，平板上只長了一個菌落（但感受態(tài)在抗性平板上隔了一天才長的，長得很多），我P了但沒有P出來條帶，是沒轉(zhuǎn)進去嗎？（電轉(zhuǎn)時間是2ms左右，質(zhì)粒是2ul+50ul感受態(tài)）。感受態(tài)是野生菌株，是自己制備的。質(zhì)粒濃度是200ng/ul。我聽說3-5ms說明轉(zhuǎn)化效率比較好，我這個是不是時間太短了啊，或者會是感受態(tài)制備有問題嗎？拜托大家?guī)兔Ψ治鱿略虬?img src="https://muchongimg.xmcimg.com/data/emuch_bbs_images/smilies/cry.gif" align="absmiddle" border="0">  乳桿菌感受態(tài)制備流程如下： 將凍存的植物乳桿菌劃MRS平板復(fù)蘇，挑取單個菌落在MRS液體培養(yǎng)輩中30℃培養(yǎng)過夜，以1：100的比例接入50 mL新的MRS液體培養(yǎng)基30℃培養(yǎng)，監(jiān)測0D500至0.3-0.4，迅速置冰上冷卻，4℃ 6000×g離心20 min，棄上清；用50 mL預(yù)冷的0.5M庶糖、10%甘油溶液重懸菌體，4℃ 6000×g離心20min，棄上清；用25mL預(yù)冷的0.5M庶糖、10%甘油、50mM EDTA溶液重懸菌體，4℃ 6000×g離心15min，棄上清；再用15 mL預(yù)冷的0.5M庶糖、10%甘油溶液重懸菌體，4℃ 6000X g離心15 min，棄上清；最后用500 µL預(yù)冷的0.5M庶糖、10%甘油溶液重懸菌體，即為植物乳桿菌感受態(tài)細胞，50µL每管分裝，-80℃保存?zhèn)溆谩?br /> 電轉(zhuǎn)過程如下： 取2ul重組質(zhì)粒加入50ul上述制備好的植物乳桿菌感受態(tài)，輕輕混勻；將以上混合物轉(zhuǎn)入冰預(yù)冷的2mm電激杯，迅速給予一個單脈沖，參數(shù)設(shè)置為2kV，25 F，200Q, 電擊后立即輕柔加入1mL冰預(yù)冷的恢復(fù)培養(yǎng)基MRS培養(yǎng)基，將菌液全部吸入一滅菌離心管，蓋緊管蓋，冰浴5min 后30℃靜置培養(yǎng)2h；將l00µL菌液涂布于含有5ug/ml的紅霉素MRS平板上，37℃靜置培養(yǎng)1-2天。 |
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