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[交流]
蛋白純化以及標簽的添加
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| 目前正在做蛋白純化，質(zhì)粒用的是pET28a，由于該質(zhì)粒自帶His-tag，所以重組質(zhì)粒構(gòu)建成功后，表達出來的蛋白不管是雜蛋白還是目的蛋白，幾乎全部帶著His-tag，用Ni柱進行蛋白純化后，得到低濃度的目的蛋白，SDS-PAGE顯示沒有雜蛋白，但只要將蛋白濃縮后，就可以看到雜蛋白，所以沒辦法得到純度高且濃度也高的目的蛋白。于是想將插入的片段的一端加入StrepⅡ，但是又擔心會不會表達出來的蛋白全部又帶有StrepⅡ標簽，會不會又無法得到高純度的、高濃度的目的蛋白。有沒有哪位道友做過相似的實驗，StrepⅡ標簽應(yīng)該如何添加才能一步純化蛋白。求交流、求指教。 |
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