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[交流]
蛋白純化以及標簽的添加
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| 目前正在做蛋白純化,質(zhì)粒用的是pET28a,由于該質(zhì)粒自帶His-tag,所以重組質(zhì)粒構(gòu)建成功后,表達出來的蛋白不管是雜蛋白還是目的蛋白,幾乎全部帶著His-tag,用Ni柱進行蛋白純化后,得到低濃度的目的蛋白,SDS-PAGE顯示沒有雜蛋白,但只要將蛋白濃縮后,就可以看到雜蛋白,所以沒辦法得到純度高且濃度也高的目的蛋白。于是想將插入的片段的一端加入StrepⅡ,但是又擔心會不會表達出來的蛋白全部又帶有StrepⅡ標簽,會不會又無法得到高純度的、高濃度的目的蛋白。有沒有哪位道友做過相似的實驗,StrepⅡ標簽應該如何添加才能一步純化蛋白。求交流、求指教。 |
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