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王姝月新蟲(chóng) (初入文壇)
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怎么提外泌體
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2013年“炸藥獎(jiǎng)”諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)?lì)C發(fā)給了三位科學(xué)家，以表彰他們發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)的主要運(yùn)輸系統(tǒng)——囊泡（外泌體等）運(yùn)輸?shù)恼{(diào)節(jié)機(jī)制，自此外泌體(Exosome) 研究井噴了，師兄也是從那時(shí)迷戀上外泌體的，已無(wú)法自拔！ 什么是外泌體，怎樣提取到優(yōu)質(zhì)的外泌體呢？今天大師兄就來(lái)分享一下多年研究的珍藏。文末更有免費(fèi)試劑、技術(shù)資料及視頻教程領(lǐng)取，讓你一次學(xué)個(gè)夠。 ✦ 什么是外泌體？有什么特征？ 外泌體（Exosome）是活細(xì)胞分泌的直徑約為 30～150 nm 的膜性囊泡。 外泌體電鏡圖[1] 外泌體幾乎存在于所有的組織、細(xì)胞間隙、體液中，包括血液、唾液、尿液，母乳等，攜帶了參與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的蛋白、miRNA、lncRNA、circRNA、mRNA 以及其降解片段，參與細(xì)胞活動(dòng)的重要調(diào)控，有望成為多種疾病的早期診斷標(biāo)志物。 ✦ 外泌體的提取方法有哪些？ ① 經(jīng)典的超速離心法 ② 柱純化法 ③ 超濾法 ④ 大分子聚合物沉降法 ⑤ 磁珠免疫沉淀法 ✦ 如何選擇一款合適的提取方式？ ① 是否具備一臺(tái)超速離心機(jī)？是否不嫌麻煩、耐得住性子？ 為了完成一次密度梯度超速離心，需要整整一天時(shí)間來(lái)做各種操作：配制不同濃度的氯化銫、預(yù)裝密度梯度液、加樣、超離管配平（懂的自然懂）、超速離心 12～16 個(gè)小時(shí)，這些都不是最難的步驟，最難的就是離心后扎針取樣了！ 有誰(shuí)被扎了，還沒(méi)有取到樣的，再舉個(gè)手！師兄同情你 30 秒... ② 是否有高速離心機(jī) 大概 90% 以上實(shí)驗(yàn)室都具備高速離心機(jī)，那么就僅考慮靠高速離心機(jī)的外泌體提取方法，比如大分子聚合沉降法或者超濾法，可購(gòu)買(mǎi)基于大分子聚合物方法的試劑盒或者超濾管。 ③ 購(gòu)買(mǎi)商品化試劑盒時(shí)該如何選？ 最重要的是要了解單位體積樣品的抽提費(fèi)用是多少，做好預(yù)算，要不太貴了老板也會(huì)心疼經(jīng)費(fèi)的！苦思冥想申請(qǐng)個(gè)基金也不容易，勤儉持家才能長(zhǎng)長(zhǎng)久久！ ✦ 外泌體提取前做哪些工作準(zhǔn)備？ 最重要的是樣品前期處理工作，這個(gè)做好了提取才有意義，才有科學(xué)價(jià)值。 ① 迅速性原則：要最大限度的縮短從樣本采集到實(shí)驗(yàn)的時(shí)間。 ② 低溫原則：所取樣本離體后，保證在實(shí)驗(yàn)前始終處于 -70℃ 以下，以避免外泌體降解。 ③ 必須的預(yù)處理操作：針對(duì)細(xì)胞上清液樣品、血清或者血漿樣品、尿液、腦脊液、腹水等樣品，需要先做低速離心 (< 3,000 rpm) 去除細(xì)胞和細(xì)胞碎片后，再將樣品存放在 -80℃ 冰箱中。 ✦ 提取的外泌體如何保存呢？ 提取好的外泌體凍存在 -80℃ 冰箱中不就完事了嗎？有很多人疑惑。 當(dāng)然不是，當(dāng)富集后的外泌體放到 -80℃ 冰箱凍存后，就如同冰凍丸子一樣，它們一個(gè)挨著一個(gè)，粘在一起，即使解凍后也未必會(huì)分的很開(kāi)。 使用這樣融化后的外泌體去做電鏡和粒徑檢測(cè)的時(shí)候就會(huì)遇到一些問(wèn)題：形態(tài)太丑、成團(tuán)或者黏連、顆粒太大，超過(guò)外泌體的官方標(biāo)準(zhǔn)尺寸，這些都是由于外泌體冷凍后造成的，都是客觀(guān)情況。 大師兄建議：在電鏡、粒徑檢測(cè)前，可以先取部分外泌體外放到 4℃ 冰箱中，其余的外泌體凍存在 -80℃ 冰箱中，以備后期使用。4℃ 冰箱中可以存儲(chǔ) 1 周左右，盡快完成實(shí)驗(yàn)。 轉(zhuǎn)載科學(xué)網(wǎng)高博博客 https://www.judeantai.cn/productinfo/1048066.html |
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11樓2023-01-06 09:34:08
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王姝月
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