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小木蟲論壇-學術(shù)科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 生物信息 » 怎么提外泌體
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怎么提外泌體
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2013年“炸藥獎”諾貝爾生理學或醫(yī)學獎頒發(fā)給了三位科學家，以表彰他們發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)的主要運輸系統(tǒng)——囊泡（外泌體等）運輸?shù)恼{(diào)節(jié)機制，自此外泌體(Exosome) 研究井噴了，師兄也是從那時迷戀上外泌體的，已無法自拔！ 什么是外泌體，怎樣提取到優(yōu)質(zhì)的外泌體呢？今天大師兄就來分享一下多年研究的珍藏。文末更有免費試劑、技術(shù)資料及視頻教程領(lǐng)取，讓你一次學個夠。 ✦ 什么是外泌體？有什么特征？ 外泌體（Exosome）是活細胞分泌的直徑約為 30～150 nm 的膜性囊泡。 外泌體電鏡圖[1] 外泌體幾乎存在于所有的組織、細胞間隙、體液中，包括血液、唾液、尿液，母乳等，攜帶了參與細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的蛋白、miRNA、lncRNA、circRNA、mRNA 以及其降解片段，參與細胞活動的重要調(diào)控，有望成為多種疾病的早期診斷標志物。 ✦ 外泌體的提取方法有哪些？ ① 經(jīng)典的超速離心法 ② 柱純化法 ③ 超濾法 ④ 大分子聚合物沉降法 ⑤ 磁珠免疫沉淀法 ✦ 如何選擇一款合適的提取方式？ ① 是否具備一臺超速離心機？是否不嫌麻煩、耐得住性子？ 為了完成一次密度梯度超速離心，需要整整一天時間來做各種操作：配制不同濃度的氯化銫、預(yù)裝密度梯度液、加樣、超離管配平（懂的自然懂）、超速離心 12～16 個小時，這些都不是最難的步驟，最難的就是離心后扎針取樣了！ 有誰被扎了，還沒有取到樣的，再舉個手！師兄同情你 30 秒... ② 是否有高速離心機 大概 90% 以上實驗室都具備高速離心機，那么就僅考慮靠高速離心機的外泌體提取方法，比如大分子聚合沉降法或者超濾法，可購買基于大分子聚合物方法的試劑盒或者超濾管。 ③ 購買商品化試劑盒時該如何選？ 最重要的是要了解單位體積樣品的抽提費用是多少，做好預(yù)算，要不太貴了老板也會心疼經(jīng)費的！苦思冥想申請個基金也不容易，勤儉持家才能長長久久！ ✦ 外泌體提取前做哪些工作準備？ 最重要的是樣品前期處理工作，這個做好了提取才有意義，才有科學價值。 ① 迅速性原則：要最大限度的縮短從樣本采集到實驗的時間。 ② 低溫原則：所取樣本離體后，保證在實驗前始終處于 -70℃ 以下，以避免外泌體降解。 ③ 必須的預(yù)處理操作：針對細胞上清液樣品、血清或者血漿樣品、尿液、腦脊液、腹水等樣品，需要先做低速離心 (< 3,000 rpm) 去除細胞和細胞碎片后，再將樣品存放在 -80℃ 冰箱中。 ✦ 提取的外泌體如何保存呢？ 提取好的外泌體凍存在 -80℃ 冰箱中不就完事了嗎？有很多人疑惑。 當然不是，當富集后的外泌體放到 -80℃ 冰箱凍存后，就如同冰凍丸子一樣，它們一個挨著一個，粘在一起，即使解凍后也未必會分的很開。 使用這樣融化后的外泌體去做電鏡和粒徑檢測的時候就會遇到一些問題：形態(tài)太丑、成團或者黏連、顆粒太大，超過外泌體的官方標準尺寸，這些都是由于外泌體冷凍后造成的，都是客觀情況。 大師兄建議：在電鏡、粒徑檢測前，可以先取部分外泌體外放到 4℃ 冰箱中，其余的外泌體凍存在 -80℃ 冰箱中，以備后期使用。4℃ 冰箱中可以存儲 1 周左右，盡快完成實驗。 轉(zhuǎn)載科學網(wǎng)高博博客 https://www.judeantai.cn/productinfo/1048066.html |
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bjdxyxy3樓
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