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| 【懸賞金幣】回答本帖問(wèn)題，作者xiko5574將贈(zèng)送您 5 個(gè)金幣 | ||
xiko5574新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
TA克隆質(zhì)粒測(cè)序
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| 最近在做TA克隆，想把EGFP片段連接在克隆載體上，載體選的是takara的T-Vector pMD19 (Simple)，酶是taq酶，連接轉(zhuǎn)化后挑白色陽(yáng)性菌落擴(kuò)增，菌液分別用m13通用引物和目的片段引物pcr都能得到目的片段，但菌液和通用引物pcr產(chǎn)物分別送公司測(cè)序后結(jié)果與EGFP和T載體完全比對(duì)不上。測(cè)序結(jié)果ncbi上blast后發(fā)現(xiàn)是其他克隆載體的新霉素抗性基因，但挑了藍(lán)色陰性菌落提質(zhì)粒送測(cè)序結(jié)果和T載體能比對(duì)上，說(shuō)明載體沒(méi)問(wèn)題，EGFP片段連接之前測(cè)序也是沒(méi)問(wèn)題那是哪里出了問(wèn)題呢？做了兩次，測(cè)序結(jié)果都是一樣的，現(xiàn)在懷疑是感受態(tài)細(xì)胞的問(wèn)題，想問(wèn)問(wèn)各位蟲(chóng)友的意見(jiàn)。 |
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fengxianp
新蟲(chóng) (小有名氣)
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2樓2022-07-11 10:58:11
烏克蘭跑男
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- 專(zhuān)業(yè): 水產(chǎn)生物免疫學(xué)與病害控制
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不妨把目的片段引物p出來(lái)的送一下測(cè)序。不測(cè)通用引物的，返回來(lái)后用你手里有通用引物測(cè)序的結(jié)果一起比對(duì)目的基因 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
3樓2022-08-07 03:35:25
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