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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » PCR相關 » TA克隆質粒測序
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| 【懸賞金幣】回答本帖問題，作者xiko5574將贈送您 5 個金幣 | ||
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TA克隆質粒測序
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| 最近在做TA克隆，想把EGFP片段連接在克隆載體上，載體選的是takara的T-Vector pMD19 (Simple)，酶是taq酶，連接轉化后挑白色陽性菌落擴增，菌液分別用m13通用引物和目的片段引物pcr都能得到目的片段，但菌液和通用引物pcr產物分別送公司測序后結果與EGFP和T載體完全比對不上。測序結果ncbi上blast后發(fā)現(xiàn)是其他克隆載體的新霉素抗性基因，但挑了藍色陰性菌落提質粒送測序結果和T載體能比對上，說明載體沒問題，EGFP片段連接之前測序也是沒問題那是哪里出了問題呢？做了兩次，測序結果都是一樣的，現(xiàn)在懷疑是感受態(tài)細胞的問題，想問問各位蟲友的意見。 |
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3樓2022-08-07 03:35:25
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