 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1465 | 回復(fù): 2 | ||
| 【懸賞金幣】回答本帖問題，作者貓喝可樂將贈送您 5 個金幣 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
貓喝可樂鐵蟲 (初入文壇)
|
[求助]
qPCR問題求助
|
|
|
想麻煩各位科研大佬幫忙看一下， 科研小白剛開始做qPCR差不多一個月， 也已經(jīng)跑出來過一些氮循環(huán)相關(guān)的基因如：noszⅠ、noszⅡ、nirK等， 目前在做的基因是amoA的古菌，但是遇到了一些問題解決不了， 已經(jīng)做過多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，且qPCR程序是用之前師兄師姐設(shè)置好的， 且質(zhì)粒和引物也是之前師兄師姐使用后沒問題的（能跑出來）， 目前的情況如下： 1、酶是takara的、引物是amoAF和amoAR這一對、稀釋質(zhì)粒是用的east dilution。 2、之前用AG的酶跑過，和Takara的情況一樣效率很高但雜帶很多。 3、考慮過是酶失活，但改進(jìn)后無變化；考慮引物不是一對，改進(jìn)后無變化。 4、考慮引物濃度太高導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增，跑pcr后發(fā)現(xiàn)條帶較為單一，有不明顯的引物二聚體。 5、在實(shí)驗(yàn)過程中的試管、水、槍頭等均是滅菌干凈的，且在無菌的通風(fēng)櫥中進(jìn)行操作。 6、目前是質(zhì)粒在擴(kuò)增以后仍是非單一主峰，且樣品也存在類似情況（如下圖-左側(cè)3列質(zhì)粒、右側(cè)3列樣品），故考慮應(yīng)該不是單純的質(zhì)粒問題。 7、發(fā)現(xiàn)稀釋質(zhì)粒在稀釋倍數(shù)比較低的時候（稀釋10、100、1000倍）溶解曲線的峰形單一且明顯，但隨稀釋倍數(shù)增加出現(xiàn)非單一峰 8、樣品基因豐度約在稀釋質(zhì)粒的3次方到5次方之間，且Takara的效率約在95-110之間。 p.s.下面為實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，麻煩各位大佬看看有什么問題，萬分感謝！ https://i.postimg.cc/kDP5F2cZ/20220406094707.jpg |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有122人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
2020051226
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 40.6
- 帖子: 15
- 在線: 5.8小時
- 蟲號: 27876328
- 注冊: 2021-12-03
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
3樓2022-04-21 16:00:12
藥界小蟲
銀蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 187.7
- 帖子: 44
- 在線: 13.9小時
- 蟲號: 3434638
- 注冊: 2014-09-22
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
2樓2022-04-12 17:10:22
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0817一志愿蘇州大學(xué)280復(fù)試調(diào)劑 +6 | kk扛 2026-03-07 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 一志愿山東大學(xué)105500藥學(xué)專碩，總分302求調(diào)劑 +5 | 五維天空 2026-03-04 | 12/600 |
|
|
[考研] 一志愿安徽大學(xué)材料工程專碩313分，求調(diào)劑的學(xué)校 +3 | Yu先生 2026-03-10 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境調(diào)劑 +4 | 曉看天暮看云 2026-03-09 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 264求調(diào)劑 +5 | thext 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工 一志愿山大 321分 求調(diào)劑 +4 | 每天散步 2026-03-09 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703求調(diào)劑 +10 | c297914 2026-03-06 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑，一志愿山東大學(xué)材料與化工，328分，政治51 +5 | 關(guān)你西紅柿929 2026-03-08 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0856求調(diào)劑 +3 | squirtle11 2026-03-07 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +9 | fjj0912 2026-03-03 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 不限學(xué)校專業(yè)的調(diào)劑同學(xué)看過來 +5 | 啊擺啊擺 2026-03-05 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 316求調(diào)劑 +3 | 林小星發(fā)大財(cái) 2026-03-05 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +9 | 一個學(xué)習(xí)者 2026-03-04 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 085602 293分求調(diào)劑 +3 | SivanNano. 2026-03-05 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 紡織、生物、化學(xué)、材料等專業(yè) +3 | Eember. 2026-03-05 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩080500復(fù)試調(diào)劑294 +3 | 四葉zjz 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿武漢理工大學(xué)-085602-總分296分-求調(diào)劑 +7 | 紫川葡柚 2026-03-04 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +7 | 哇塞王帥 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085601 材料305分求助 +4 | 泡泡郵件 2026-03-03 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 322,求調(diào)劑 +3 | 菜菜愛玩 2026-03-04 | 3/150 |
|