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| 【懸賞金幣】回答本帖問(wèn)題，作者云之遙V將贈(zèng)送您 6 個(gè)金幣 | |||
云之遙V新蟲 (初入文壇)
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[求助]
畢赤酵母pGAPZαA轉(zhuǎn)化染菌問(wèn)題 已有1人參與
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求助畢赤酵母轉(zhuǎn)化過(guò)程中的問(wèn)題，使用的是pGAPZαA質(zhì)粒，Zeocin濃度100ug/ml，感受態(tài)使用山梨醇處理制備而成，現(xiàn)做現(xiàn)用，轉(zhuǎn)化后對(duì)照平板總是長(zhǎng)菌，不知道原因，師姐就沒(méi)遇到過(guò)類似問(wèn)題，本人懷疑可能有以下幾個(gè)可能原因： 1.抗生素濃度不夠，但師姐同樣的質(zhì)粒50ug/ml都沒(méi)出現(xiàn)過(guò)這種問(wèn)題�。�！ 2.電轉(zhuǎn)時(shí)加菌液過(guò)多，自己加了200ul，文獻(xiàn)都是100ul，導(dǎo)致 轉(zhuǎn)化效率不夠，但為什么會(huì)長(zhǎng)菌呢？ 3.離心涂布時(shí)留菌液太多，留100ul和200ul，我都試過(guò)，100ul涂布比較干，200ul比較濕潤(rùn)，難道這也影響？ 4.100ml菌液，od1.3左右，感受態(tài)制備4，5管，難道說(shuō)菌太多抗生素?zé)o法抑制？之前做過(guò)分裝10管的話對(duì)照不會(huì)長(zhǎng)菌，但會(huì)不會(huì)影響轉(zhuǎn)化效率，而且別人正常分裝4,5管也沒(méi)事呀，哭了。。。 求助大神幫忙解決，很平常的轉(zhuǎn)化一直困擾我很久了。  |
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一些建議： 1.轉(zhuǎn)化用菌株驗(yàn)證一下，是不是染菌了，自帶了zeocin抗性 2. 電轉(zhuǎn)杯污染，重新處理電轉(zhuǎn)杯，重新轉(zhuǎn)化。(電轉(zhuǎn)過(guò)程，比如菌液分裝量，涂布之類的，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果一般不會(huì)有太大的影響的) 祝好！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2022-03-16 11:00:14
3樓2022-03-23 22:50:24
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