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東波、、、新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
天然產(chǎn)物分離純化中離子交換原理! 已有1人參與
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分離純化現(xiàn)在主要是純化多糖和蛋白質(zhì),離子交換用的填料種類也比較多,比如DEAE Sepharose FF和DEAE纖維素-52應(yīng)該是最常用兩種填料,洗脫過(guò)程原理應(yīng)該差不多。 問(wèn)題一:為什么DEAE FF需要緩沖液提供一定的ph環(huán)境,DEAE 纖維素-52則不需要,用的純水。 問(wèn)題二:有人解答是緩沖液提供的ph環(huán)境,能讓樣品帶負(fù)電,那原理是怎樣的呢? 問(wèn)題三(最疑惑):洗脫完畢,用NaCl或NaOH再生時(shí),Cl-和OH-離子已經(jīng)和交換基團(tuán)結(jié)合滿了,再上樣品(多糖或蛋白質(zhì))時(shí)怎么又能和樣品結(jié)合呢?可能是樣品結(jié)合能力強(qiáng)吧?如果是結(jié)合能力強(qiáng),那怎么又能用NaCl或NaOH洗脫下來(lái)呢? 很疑惑。! @biostar2009 @wizardfan 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
金蟲(chóng) (小有名氣)
新蟲(chóng) (小有名氣)
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問(wèn)題三換個(gè)說(shuō)法問(wèn),在逐漸增大高濃度鹽溶液把樣品洗脫干凈后,那么填料上已經(jīng)結(jié)合滿了高強(qiáng)度鹽離子,所以下次上樣,樣品又怎么會(huì)吸附到填料上呢? 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
金蟲(chóng) (小有名氣)
新蟲(chóng) (小有名氣)
送紅花一朵 |
謝謝您的回復(fù)! buffer 堿性使產(chǎn)品帶負(fù)電,酸性下帶正電,等電點(diǎn)比目標(biāo)樣品高是陰離子交換,比目標(biāo)樣品低是陽(yáng)離子交換,這是我個(gè)人理解,不知道是不是這樣? 我做的是多糖的純化,是陰離子交換,用deae ff填料,高鹽洗脫Cl-替換出多糖后,再用緩沖液(不含鹽)進(jìn)行平衡,直接進(jìn)行第二個(gè)周期的多糖純化. 但有一點(diǎn)不理解的是作為替換的CI-將多糖洗脫下來(lái)后,留在基團(tuán)上的CI-是怎么樣去掉的呢?因?yàn)橹挥兄挥腥サ籼盍喜拍芑謴?fù)到最初的狀態(tài),才能進(jìn)行下一次純化 ? |
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