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東波、、、新蟲 (小有名氣)
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天然產(chǎn)物分離純化中離子交換原理！ 已有1人參與
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分離純化現(xiàn)在主要是純化多糖和蛋白質(zhì)，離子交換用的填料種類也比較多，比如DEAE Sepharose FF和DEAE纖維素-52應(yīng)該是最常用兩種填料，洗脫過程原理應(yīng)該差不多。 問題一：為什么DEAE FF需要緩沖液提供一定的ph環(huán)境，DEAE 纖維素-52則不需要，用的純水。 問題二：有人解答是緩沖液提供的ph環(huán)境，能讓樣品帶負(fù)電，那原理是怎樣的呢？ 問題三（最疑惑）：洗脫完畢，用NaCl或NaOH再生時，Cl-和OH-離子已經(jīng)和交換基團(tuán)結(jié)合滿了，再上樣品（多糖或蛋白質(zhì)）時怎么又能和樣品結(jié)合呢？可能是樣品結(jié)合能力強吧？如果是結(jié)合能力強，那怎么又能用NaCl或NaOH洗脫下來呢？ 很疑惑�。�！ @biostar2009 @wizardfan 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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東波、、、
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問題三換個說法問，在逐漸增大高濃度鹽溶液把樣品洗脫干凈后，那么填料上已經(jīng)結(jié)合滿了高強度鹽離子，所以下次上樣，樣品又怎么會吸附到填料上呢？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2022-02-12 01:59:30
zjutwwt
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3樓2022-02-15 15:44:31
東波、、、
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送紅花一朵 |
謝謝您的回復(fù)! buffer 堿性使產(chǎn)品帶負(fù)電,酸性下帶正電,等電點比目標(biāo)樣品高是陰離子交換,比目標(biāo)樣品低是陽離子交換,這是我個人理解,不知道是不是這樣? 我做的是多糖的純化,是陰離子交換,用deae ff填料,高鹽洗脫Cl-替換出多糖后,再用緩沖液(不含鹽)進(jìn)行平衡,直接進(jìn)行第二個周期的多糖純化. 但有一點不理解的是作為替換的CI-將多糖洗脫下來后,留在基團(tuán)上的CI-是怎么樣去掉的呢?因為只有只有去掉填料才能恢復(fù)到最初的狀態(tài),才能進(jìn)行下一次純化  ? |
4樓2022-02-17 17:22:25
zjutwwt
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5樓2022-02-25 15:13:52
東波、、、
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再次感謝您^O^ cl-留在上面，平衡液平衡后上樣，不影響下一次的純化嗎？因為剛買來的填料第一次使用的話，上面是沒有結(jié)合CI -的？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2022-03-03 00:48:07
7樓2023-02-27 09:26:00
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