 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1788 | 回復(fù): 3 | |||
ArthurFSun鐵蟲 (小有名氣)
|
[交流]
293細(xì)胞生產(chǎn)重組蛋白，上清中檢測(cè)不到 已有3人參與
|
|
大家好， 請(qǐng)教一個(gè)問題。 最近我在用293F細(xì)胞表達(dá)帶HIS標(biāo)簽的重組蛋白。培養(yǎng)體系是600 mL。我發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染36小時(shí)后，用western blot和免疫熒光可在細(xì)胞內(nèi)檢測(cè)到有目的蛋白表達(dá)。但在轉(zhuǎn)染后24-120 h的任何時(shí)間點(diǎn)，在上清中用 western blot卻檢測(cè)不到目的蛋白。用超濾管將上清濃縮10倍，western blot仍然檢測(cè)不到目的蛋白。將轉(zhuǎn)染后36h的上清掛鎳柱，洗脫時(shí)沒有出現(xiàn)目的蛋白峰。 請(qǐng)問，（1）上清中檢測(cè)不到蛋白可以能什么原因？是因?yàn)榈鞍撞环置趩幔康鞍讕в刑烊恍盘?hào)肽，理論上是應(yīng)該分泌的。western blot檢測(cè)不到是因?yàn)榉置诹刻蛦幔繑U(kuò)大培養(yǎng)體系有可能檢測(cè)的蛋白嗎？ （2）我用的培養(yǎng)基的廠家說明書推薦細(xì)胞培養(yǎng)5天后收獲培養(yǎng)基純化蛋白，但是我發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞培養(yǎng)48小時(shí)已經(jīng)變暗，細(xì)胞數(shù)目也開始下降。請(qǐng)問有經(jīng)驗(yàn)的前輩，293F細(xì)胞表達(dá)蛋白時(shí)，細(xì)胞密度多大時(shí)開始轉(zhuǎn)染？轉(zhuǎn)染后一般培養(yǎng)幾天后開始純化蛋白？ 謝謝！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有70人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
啾啾667
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: -19.5
- 帖子: 12
- 在線: 24.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 14351134
- 注冊(cè): 2019-02-25
2樓2022-05-24 13:39:07
Arp熱愛SC
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 18.5
- 帖子: 2
- 在線: 5.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 14968414
- 注冊(cè): 2019-04-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 抗體工程學(xué)
3樓2023-03-26 20:49:43
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
|
Polycystine-poly(His,Arg)1:5 (CHR) transfection of CHO-DG44 cells for the production of recombinant IgG antibody CHO-DG44 cells, CHO-K1 cells and MEFs CHR is composed of 100% amino acids,without any cytotoxic PEI. CHR-mediated transfection does not require complexpre-formation, works well in serum-containing media and is biodegradable, which may prevent cumulative cytotoxicity and facilitates downstream processing. |
4樓2023-04-01 13:05:51
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 ArthurFSun 的主題更新
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研]
材料325求調(diào)劑
 30+6
|
mariusuki 2026-03-02 | 12/600 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0817化學(xué)工程與技術(shù)312分求調(diào)劑 +6 | T123 tt 2026-03-04 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0703求調(diào)劑 +4 | c297914 2026-03-06 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +4 | 52hz~~ 2026-03-05 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 化學(xué)工程與技術(shù)316求調(diào)劑
+5
|
Sixuan wang 2026-03-06 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 材料工程調(diào)劑
+6
|
zbcm_zbcm 2026-03-05 | 6/300 |
|
|
|
[考博] 26申博-目前4篇SCI一作 +4 | chen_2024 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 281電子信息求調(diào)劑 +5 | jhtfeybgj 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 304分材料專碩求調(diào)劑 +11 | qiuzhigril 2026-03-03 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑材料學(xué)碩 +6 | 詞凝Y 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué) 一志愿東北大學(xué) 279分求調(diào)劑 +4 | 聶樂平 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085600 材料與化工 298 +14 | 小西笑嘻嘻 2026-03-03 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 材料化工調(diào)劑 +15 | 今夏不夏 2026-03-01 | 18/900 |
|
|
|
[考研] 085700資環(huán)求調(diào)劑，初始279，六級(jí)已過，英語能力強(qiáng) +3 | 085700資環(huán)調(diào)劑 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿東北大學(xué)化學(xué)314分求調(diào)劑 +5 | lr1212.. 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +3 | MuoLuo1312 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0854復(fù)試調(diào)劑 276 +5 | wmm9 2026-03-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 261求調(diào)劑 +3 | 陸lh 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 誠招農(nóng)業(yè)博士 +3 | 心欣向榮 2026-02-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 291 求調(diào)劑 +3 | 化工2026屆畢業(yè)?/a> 2026-03-02 | 3/150 |
|