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小小書(shū)蟲(chóng)飛新蟲(chóng) (小有名氣)
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非洲豬瘟的檢測(cè)方法分析
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在我國(guó)畜牧養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展工程中，豬養(yǎng)殖業(yè)在其中占據(jù)著重要的地位。隨著當(dāng)下人們經(jīng)濟(jì)水平逐漸提高，對(duì)豬養(yǎng)殖業(yè)也提出了更高的要求，豬養(yǎng)殖工作逐漸受到了人們更高的重視，本文所研究的就是針對(duì)非洲豬瘟的檢測(cè)工作。 隨著當(dāng)前人們經(jīng)濟(jì)水平逐漸提高，對(duì)食品的需求也逐漸多樣化，而肉類產(chǎn)品則是人們?nèi)粘Ｉ钪兴匦璧模渲胸i肉更是在食品市場(chǎng)中占據(jù)著重要的地位。而豬養(yǎng)殖業(yè)也是基層地區(qū)脫貧致富的重要事業(yè)。在實(shí)際豬養(yǎng)殖工作中，非洲豬瘟作為一種高致死性傳染性疾病，一直以來(lái)深受養(yǎng)殖工作者和相關(guān)部門(mén)的重視，并針對(duì)這一疾病開(kāi)展了相關(guān)的檢測(cè)工作。 非洲豬瘟來(lái)源和癥狀 對(duì)野豬和家豬而言，非洲豬瘟是一種致死性和傳染性的極高的疾病，高達(dá)100%的死亡率，主要病因是感染了非洲豬瘟病毒（ASFV）。 結(jié)合相關(guān)臨床研究可知，該病主要分為四種類型。其中急性型所表現(xiàn)的潛伏期較短，一般在5d以內(nèi)發(fā)病，臨床癥狀表現(xiàn)為表皮發(fā)黑、高熱等，患病豬通常在1周內(nèi)就會(huì)死亡。該病的主要特征就是患病豬會(huì)出現(xiàn)發(fā)熱、出血性病變等，部分毒株所引起的病癥具有較高的死亡率和發(fā)病率。 針對(duì)這一疾病，目前尚且沒(méi)有有效的疫苗，在當(dāng)前對(duì)臨床癥狀的研究發(fā)展非洲豬瘟與經(jīng)典豬瘟十分相似，想要有效防控和根除該病最為關(guān)鍵的就是簡(jiǎn)便、靈敏的診斷技術(shù)。 非洲豬瘟的慢性病例的某些癥狀與艾滋病相似，該病也因此被相關(guān)研究者稱為豬的獲得性免疫缺乏綜合征。因預(yù)防該病的疫苗當(dāng)前還沒(méi)有研制出來(lái)。 在診斷和鑒別方式上，針對(duì)非洲豬瘟或與其相似臨床癥狀的疾病尚且沒(méi)有有效的手段，并且缺乏對(duì)于活病毒的診斷技術(shù)手段。隨著非洲豬瘟逐步蔓延，對(duì)病毒診斷鑒別技術(shù)的完善工作也變得越發(fā)急切，而在實(shí)驗(yàn)室工作中，則需要進(jìn)一步完善檢測(cè)方法以避免漏洞的出現(xiàn)。 非洲豬瘟的檢測(cè) 針對(duì)非洲豬瘟，目前還沒(méi)有找到治愈和防控的疫苗，因此我國(guó)針對(duì)ASFV建立了高效完善的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，隨著檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的建立，為非洲豬瘟的防控和治療工作打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。就目前非洲豬瘟研究現(xiàn)狀來(lái)看，針對(duì)非洲豬瘟的病原學(xué)診斷技術(shù)主要包括抗原檢測(cè)、活病毒檢測(cè)、核酸檢測(cè)等。 在當(dāng)前的ASFV檢測(cè)技術(shù)中，主要分為兩大類：針對(duì)病毒DNA的核酸檢測(cè)技術(shù)；針對(duì)病毒抗原、抗體反應(yīng)的免疫學(xué)技術(shù)等。世界衛(wèi)生組織也為該病推薦了ASFV檢測(cè)方法，通過(guò)研究又總結(jié)了實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)、PCR檢測(cè)和ELISA檢測(cè)等。 借助免疫學(xué)知識(shí)來(lái)檢測(cè)抗體，借助檢測(cè)工作我們?cè)敿?xì)地掌握了ASFV的感染過(guò)程、發(fā)生階段，這為后續(xù)的治療工作提供了依據(jù)，但這種檢測(cè)方式存在一定弊端，就是抗體必須要感染病毒達(dá)到一定程度才會(huì)出現(xiàn)，這在一定程度上會(huì)延誤治療，因此在ELISA等其他抗體檢測(cè)中存在一定局限性。 而在豬感染非洲豬瘟病毒的早期，借助于PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR等分子生物學(xué)技術(shù)就可以實(shí)現(xiàn)對(duì)病毒核酸的檢測(cè)，對(duì)于早期的檢測(cè)工作，針對(duì)這種方法的研究和普及具有著重要的作用。實(shí)際上，針對(duì)非洲豬瘟的檢測(cè)具有很多種實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法，但也各有優(yōu)勢(shì)和不足。 核酸檢測(cè)，目前應(yīng)用最為廣泛的檢測(cè)技術(shù)就是PCR檢測(cè)技術(shù)，該項(xiàng)檢測(cè)技術(shù)的靈敏度較高且特異性強(qiáng)，另外還具有操作簡(jiǎn)單、快捷等特點(diǎn)。但在擴(kuò)增后，需要利用溴化乙錠來(lái)開(kāi)展電泳檢測(cè)，該種方法具有較低的敏感性，在當(dāng)前檢測(cè)技術(shù)中屬于最簡(jiǎn)單的分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)。針對(duì)保存不當(dāng)?shù)慕M織血液、血液樣品等，也可利用PCR技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法可以在其中引入光譜技術(shù)，借助熒光信號(hào)的強(qiáng)弱變化定量來(lái)測(cè)量特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的量，對(duì)敏感性低這一問(wèn)題予以有效解決，而且在環(huán)境中減輕了電泳檢測(cè)中溴化乙錠所造成的污染。通過(guò)利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)，可以同時(shí)針對(duì)大批量樣品開(kāi)展快速檢測(cè)工作，具有著高敏感性、高特異性等特點(diǎn)，在當(dāng)前非洲豬瘟檢測(cè)工作得到了最為廣泛的應(yīng)用。 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），該項(xiàng)試驗(yàn)是當(dāng)前最為常用的免疫學(xué)診斷技術(shù)，該實(shí)驗(yàn)操作具有操作簡(jiǎn)單、速度快的優(yōu)點(diǎn)，可用于豬群中ASFV感染的大規(guī)模調(diào)查，但無(wú)法對(duì)ASFV的早期感染做出診斷，具有一定的滯后性。 再為大家介紹一種可應(yīng)用于現(xiàn)場(chǎng)直接快速核酸檢測(cè)的方法，來(lái)自于蘇州先達(dá)基因科技有限公司（gendx.cn），依托其自主開(kāi)發(fā)的新一代核酸檢測(cè)技術(shù)（New ERA）,配套熒光檢測(cè)儀，打造的一體化核酸檢測(cè)解決方案”，無(wú)需繁雜樣本處理，操作簡(jiǎn)單，可應(yīng)用于野外非洲豬瘟現(xiàn)場(chǎng)核酸檢測(cè)。 該方案利用計(jì)算機(jī)分子設(shè)計(jì)（Molecular Design）、定向進(jìn)化(Direct Evolution)、親和力成熟(Affinity Maturation)等制藥領(lǐng)域高端技術(shù)對(duì)PCR和生物體遺傳物質(zhì)自身擴(kuò)增復(fù)制所必需的聚合酶、核酸內(nèi)切酶、單鏈結(jié)合蛋白等進(jìn)行了多次改造篩選，先達(dá)基因開(kāi)發(fā)了新一代恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（ERA技術(shù)），在恒定溫度條件下，5-8分鐘即可將DNA/RNA擴(kuò)增數(shù)億倍，配合獨(dú)特的引物與探針自環(huán)化結(jié)構(gòu)，使檢測(cè)時(shí)間僅需10分鐘即可完成。靈敏度特異性可與常規(guī)熒光定量PCR媲美。 結(jié)語(yǔ) 從上述分析可知，非洲豬瘟作為一種全新的外來(lái)疫病，且具有高傳染性和致死性，目前尚沒(méi)有找到有效的疫苗進(jìn)行防控，因此也受到了我國(guó)畜牧養(yǎng)殖業(yè)的高度重視，并為此成立了病毒檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，上述針對(duì)非洲豬瘟的檢測(cè)方法進(jìn)行了簡(jiǎn)要分析，希望對(duì)相關(guān)部門(mén)工作人員有所幫助。 |
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