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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » PCR相關 » 非洲豬瘟的檢測方法分析
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非洲豬瘟的檢測方法分析
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在我國畜牧養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展工程中，豬養(yǎng)殖業(yè)在其中占據(jù)著重要的地位。隨著當下人們經(jīng)濟水平逐漸提高，對豬養(yǎng)殖業(yè)也提出了更高的要求，豬養(yǎng)殖工作逐漸受到了人們更高的重視，本文所研究的就是針對非洲豬瘟的檢測工作。 隨著當前人們經(jīng)濟水平逐漸提高，對食品的需求也逐漸多樣化，而肉類產(chǎn)品則是人們日常生生活中所必需的，其中豬肉更是在食品市場中占據(jù)著重要的地位。而豬養(yǎng)殖業(yè)也是基層地區(qū)脫貧致富的重要事業(yè)。在實際豬養(yǎng)殖工作中，非洲豬瘟作為一種高致死性傳染性疾病，一直以來深受養(yǎng)殖工作者和相關部門的重視，并針對這一疾病開展了相關的檢測工作。 非洲豬瘟來源和癥狀 對野豬和家豬而言，非洲豬瘟是一種致死性和傳染性的極高的疾病，高達100%的死亡率，主要病因是感染了非洲豬瘟病毒（ASFV）。 結合相關臨床研究可知，該病主要分為四種類型。其中急性型所表現(xiàn)的潛伏期較短，一般在5d以內發(fā)病，臨床癥狀表現(xiàn)為表皮發(fā)黑、高熱等，患病豬通常在1周內就會死亡。該病的主要特征就是患病豬會出現(xiàn)發(fā)熱、出血性病變等，部分毒株所引起的病癥具有較高的死亡率和發(fā)病率。 針對這一疾病，目前尚且沒有有效的疫苗，在當前對臨床癥狀的研究發(fā)展非洲豬瘟與經(jīng)典豬瘟十分相似，想要有效防控和根除該病最為關鍵的就是簡便、靈敏的診斷技術。 非洲豬瘟的慢性病例的某些癥狀與艾滋病相似，該病也因此被相關研究者稱為豬的獲得性免疫缺乏綜合征。因預防該病的疫苗當前還沒有研制出來。 在診斷和鑒別方式上，針對非洲豬瘟或與其相似臨床癥狀的疾病尚且沒有有效的手段，并且缺乏對于活病毒的診斷技術手段。隨著非洲豬瘟逐步蔓延，對病毒診斷鑒別技術的完善工作也變得越發(fā)急切，而在實驗室工作中，則需要進一步完善檢測方法以避免漏洞的出現(xiàn)。 非洲豬瘟的檢測 針對非洲豬瘟，目前還沒有找到治愈和防控的疫苗，因此我國針對ASFV建立了高效完善的檢測實驗室，隨著檢測實驗室的建立，為非洲豬瘟的防控和治療工作打下了堅實的基礎。就目前非洲豬瘟研究現(xiàn)狀來看，針對非洲豬瘟的病原學診斷技術主要包括抗原檢測、活病毒檢測、核酸檢測等。 在當前的ASFV檢測技術中，主要分為兩大類：針對病毒DNA的核酸檢測技術；針對病毒抗原、抗體反應的免疫學技術等。世界衛(wèi)生組織也為該病推薦了ASFV檢測方法，通過研究又總結了實時熒光定量PCR檢測、PCR檢測和ELISA檢測等。 借助免疫學知識來檢測抗體，借助檢測工作我們詳細地掌握了ASFV的感染過程、發(fā)生階段，這為后續(xù)的治療工作提供了依據(jù)，但這種檢測方式存在一定弊端，就是抗體必須要感染病毒達到一定程度才會出現(xiàn)，這在一定程度上會延誤治療，因此在ELISA等其他抗體檢測中存在一定局限性。 而在豬感染非洲豬瘟病毒的早期，借助于PCR、實時熒光定量PCR等分子生物學技術就可以實現(xiàn)對病毒核酸的檢測，對于早期的檢測工作，針對這種方法的研究和普及具有著重要的作用。實際上，針對非洲豬瘟的檢測具有很多種實驗室檢測方法，但也各有優(yōu)勢和不足。 核酸檢測，目前應用最為廣泛的檢測技術就是PCR檢測技術，該項檢測技術的靈敏度較高且特異性強，另外還具有操作簡單、快捷等特點。但在擴增后，需要利用溴化乙錠來開展電泳檢測，該種方法具有較低的敏感性，在當前檢測技術中屬于最簡單的分子生物學檢測技術。針對保存不當?shù)慕M織血液、血液樣品等，也可利用PCR技術進行檢測。 采用實時熒光定量PCR方法可以在其中引入光譜技術，借助熒光信號的強弱變化定量來測量特異性擴增產(chǎn)物的量，對敏感性低這一問題予以有效解決，而且在環(huán)境中減輕了電泳檢測中溴化乙錠所造成的污染。通過利用實時熒光定量PCR檢測技術，可以同時針對大批量樣品開展快速檢測工作，具有著高敏感性、高特異性等特點，在當前非洲豬瘟檢測工作得到了最為廣泛的應用。 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA），該項試驗是當前最為常用的免疫學診斷技術，該實驗操作具有操作簡單、速度快的優(yōu)點，可用于豬群中ASFV感染的大規(guī)模調查，但無法對ASFV的早期感染做出診斷，具有一定的滯后性。 再為大家介紹一種可應用于現(xiàn)場直接快速核酸檢測的方法，來自于蘇州先達基因科技有限公司（gendx.cn），依托其自主開發(fā)的新一代核酸檢測技術（New ERA）,配套熒光檢測儀，打造的一體化核酸檢測解決方案”，無需繁雜樣本處理，操作簡單，可應用于野外非洲豬瘟現(xiàn)場核酸檢測。 該方案利用計算機分子設計（Molecular Design）、定向進化(Direct Evolution)、親和力成熟(Affinity Maturation)等制藥領域高端技術對PCR和生物體遺傳物質自身擴增復制所必需的聚合酶、核酸內切酶、單鏈結合蛋白等進行了多次改造篩選，先達基因開發(fā)了新一代恒溫擴增技術（ERA技術），在恒定溫度條件下，5-8分鐘即可將DNA/RNA擴增數(shù)億倍，配合獨特的引物與探針自環(huán)化結構，使檢測時間僅需10分鐘即可完成。靈敏度特異性可與常規(guī)熒光定量PCR媲美。 結語 從上述分析可知，非洲豬瘟作為一種全新的外來疫病，且具有高傳染性和致死性，目前尚沒有找到有效的疫苗進行防控，因此也受到了我國畜牧養(yǎng)殖業(yè)的高度重視，并為此成立了病毒檢測實驗室，上述針對非洲豬瘟的檢測方法進行了簡要分析，希望對相關部門工作人員有所幫助。 |
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