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Chsir

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[求助] 有沒(méi)有大佬做過(guò)FM4-64染料染色的？為何我用了很低的劑量胞內(nèi)全被染上色了已有1人參與

RT，我用文獻(xiàn)推薦的劑量，甚至稀釋了很多倍，染色效果依然不好，胞內(nèi)全被染上色了

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1樓 2021-11-08 14:22:40

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Chsir

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我是用的甲醇溶解，不知道是否有影響

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2樓2021-11-08 16:24:07

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用戶曉曉

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【答案】應(yīng)助回帖

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Chsir: 金幣+20, ★★★很有幫助 2021-11-15 18:58:38

這個(gè)染料和DIO/DID這些染料的染色都是非常迅速的，所以濃度不是最關(guān)鍵的問(wèn)題，染色時(shí)間才是！
我看你是用甲醛固定了。固定過(guò)的細(xì)胞通透性一般增加，染料更容易進(jìn)入細(xì)胞造成胞內(nèi)染色，因?yàn)榘麅?nèi)一樣很多膜結(jié)構(gòu)或者脂類物質(zhì)。

建議就是染色最長(zhǎng)時(shí)間不超過(guò)2分鐘！甚至你可以嘗試1分鐘或者更短的時(shí)間，
還有重要的一點(diǎn)就是第一遍洗要迅速，不能洗好幾分鐘，因?yàn)檫@時(shí)候低濃度的染料殘留依然會(huì)繼續(xù)持續(xù)染色。

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3樓2021-11-10 20:02:48

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引用回帖:

3樓: Originally posted by 用戶曉曉 at 2021-11-10 20:02:48
這個(gè)染料和DIO/DID這些染料的染色都是非常迅速的，所以濃度不是最關(guān)鍵的問(wèn)題，染色時(shí)間才是！
我看你是用甲醛固定了。固定過(guò)的細(xì)胞通透性一般增加，染料更容易進(jìn)入細(xì)胞造成胞內(nèi)染色，因?yàn)榘麅?nèi)一樣很多膜結(jié)構(gòu)或者脂 ...

你好，不好意思才回復(fù)。我也發(fā)現(xiàn)了這個(gè)問(wèn)題，所以換成蒸餾水溶解了。我現(xiàn)在又面臨另一個(gè)問(wèn)題，就是普通的熒光顯微鏡（自帶不同濾片）可能無(wú)法區(qū)分藻類自帶的熒光與這個(gè)染料的熒光，很多文獻(xiàn)中的照片是如何用共聚焦顯微鏡拍攝的（因?yàn)楣簿劢癸@微鏡其實(shí)也是熒光顯微鏡）

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4樓2021-11-15 18:58:27

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引用回帖:

4樓: Originally posted by Chsir at 2021-11-15 18:58:27
你好，不好意思才回復(fù)。我也發(fā)現(xiàn)了這個(gè)問(wèn)題，所以換成蒸餾水溶解了。我現(xiàn)在又面臨另一個(gè)問(wèn)題，就是普通的熒光顯微鏡（自帶不同濾片）可能無(wú)法區(qū)分藻類自帶的熒光與這個(gè)染料的熒光，很多文獻(xiàn)中的照片是如何用共聚焦 ...

如果自帶熒光那么選擇染料時(shí)候就應(yīng)該避開(kāi)自帶熒光波段。無(wú)論共聚焦還是普通熒光顯微鏡都是無(wú)法區(qū)分光是由誰(shuí)發(fā)出來(lái)的。

還有就是有一種可能就是雖然是發(fā)同種顏色熒光，但自發(fā)熒光峰值波長(zhǎng)和染料熒光波長(zhǎng)有一定的差異（即有非重疊波段），這時(shí)候共聚焦就顯得“高級(jí)”了，因?yàn)楣簿劢挂话阃N顏色熒光也配置有不同的波長(zhǎng)通道可以選擇，這時(shí)候選擇非重疊波段檢測(cè)，就能避開(kāi)自發(fā)熒光。

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5樓2021-11-19 21:53:09

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5樓: Originally posted by 用戶曉曉 at 2021-11-19 21:53:09
如果自帶熒光那么選擇染料時(shí)候就應(yīng)該避開(kāi)自帶熒光波段。無(wú)論共聚焦還是普通熒光顯微鏡都是無(wú)法區(qū)分光是由誰(shuí)發(fā)出來(lái)的。

還有就是有一種可能就是雖然是發(fā)同種顏色熒光，但自發(fā)熒光峰值波長(zhǎng)和染料熒光波長(zhǎng)有一定的 ...

謝謝

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6樓2021-11-20 12:13:53

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