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[求助]
求助于各位老師！過(guò)表達(dá)蛋白條帶異常，過(guò)表達(dá)條帶不與內(nèi)源重合
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各位老師，同門(mén)好，我面臨的主要問(wèn)題是，用PCDH（載體圖譜如下圖1），帶有3Flag標(biāo)簽，及T2A元件 構(gòu)建目的蛋白過(guò)表達(dá)載體，病毒包裝后，經(jīng)過(guò)三天puro藥篩，對(duì)藥篩后得到的細(xì)胞進(jìn)行WB檢測(cè)，WB結(jié)果如下圖2，293穩(wěn)賺細(xì)胞株結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá)條帶位于內(nèi)源條帶上方，分子量大小明顯大于內(nèi)源條帶，而預(yù)測(cè)蛋白分子量為70.8kDa, 表達(dá)蛋白預(yù)測(cè)分子量為75.91kDa, 用10%的分離膠會(huì)有如此明顯差異嗎，12%的膠我也跑過(guò)，也是明顯的兩條帶。 懇請(qǐng)各位老師，同門(mén)指點(diǎn)！ 圖1.jpg 圖2.jpg |
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道理明明我都懂
新蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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這……70kDa大小的蛋白，5kD是怎么做到這么明顯的��？如果真的只相差5kD的話，求WB條件！制膠濃度，轉(zhuǎn)膜時(shí)間等等…… 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
7樓2021-11-30 23:44:39
2樓2021-10-12 16:58:23
3樓2021-10-12 20:19:51
4樓2021-10-12 20:43:20
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