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學員CSJmmu銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
質(zhì)粒提取濃度低，很多方法都試過了，求助大佬們解決方法 已有3人參與
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質(zhì)粒提取濃度低，多的時候100ng/ul，少的時候只有20多。很多網(wǎng)上提示的點都改正過了。 菌是新從庫存里劃的，搖菌時間16小時左右，后來又把質(zhì)粒轉(zhuǎn)化之后重新劃，再提取依然是沒有提高。根據(jù)官網(wǎng)的信息，質(zhì)粒是高拷貝。 抗生素濃度加倍過，也有在8小時左右的時候再加過一次（因為有人說氨芐會慢慢分解導致雜菌生長），也沒有效果。 提取用的是天根的質(zhì)粒小提試劑盒，菌液用了1.5毫升（主要是多了之后裂解效果不是很好，即使五分鐘了也比較渾濁） PW洗過之后有在室溫放置5-10分鐘以揮發(fā)酒精 EB buffer有提前65水浴過，加入洗脫液后室溫放置2分鐘，洗脫了兩次。 另外偶爾有提取稍微高一點的時候就去酶切了，切膠回收效率更低。。。點樣應(yīng)該有1微克，但是收回后也就只有幾納克了。 因為這倆操作上有相似之處，所以想問問大佬們是不是我有哪種共性的錯誤導致兩個實驗效率都很低。 謝謝大家～ |
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7樓2022-04-22 11:17:16
kshdd
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2樓2021-09-25 13:23:03
軒轅佑德
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3樓2021-09-25 15:44:46
網(wǎng)海一粟
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- 專業(yè): 生物化學
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你用的什么擴增菌株？保存在表達菌株里的質(zhì)�；蚰惆奄|(zhì)粒轉(zhuǎn)化到了表達菌株，那確實量少。如果這些信息不清楚，按你現(xiàn)在的做法，準備個1.5mLx5或更多的裂解上清，用同一根柱子吸附就行了。另外pw洗過后沒必要放，延長離心時間到4分鐘就行了，去酒精效果更好 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2021-09-26 04:20:21
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