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學(xué)員CSJmmu銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
質(zhì)粒提取濃度低，很多方法都試過了，求助大佬們解決方法 已有3人參與
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質(zhì)粒提取濃度低，多的時(shí)候100ng/ul，少的時(shí)候只有20多。很多網(wǎng)上提示的點(diǎn)都改正過了。 菌是新從庫存里劃的，搖菌時(shí)間16小時(shí)左右，后來又把質(zhì)粒轉(zhuǎn)化之后重新劃，再提取依然是沒有提高。根據(jù)官網(wǎng)的信息，質(zhì)粒是高拷貝。 抗生素濃度加倍過，也有在8小時(shí)左右的時(shí)候再加過一次（因?yàn)橛腥苏f氨芐會(huì)慢慢分解導(dǎo)致雜菌生長(zhǎng)），也沒有效果。 提取用的是天根的質(zhì)粒小提試劑盒，菌液用了1.5毫升（主要是多了之后裂解效果不是很好，即使五分鐘了也比較渾濁） PW洗過之后有在室溫放置5-10分鐘以揮發(fā)酒精 EB buffer有提前65水浴過，加入洗脫液后室溫放置2分鐘，洗脫了兩次。 另外偶爾有提取稍微高一點(diǎn)的時(shí)候就去酶切了，切膠回收效率更低。。。點(diǎn)樣應(yīng)該有1微克，但是收回后也就只有幾納克了。 因?yàn)檫@倆操作上有相似之處，所以想問問大佬們是不是我有哪種共性的錯(cuò)誤導(dǎo)致兩個(gè)實(shí)驗(yàn)效率都很低。 謝謝大家～ |
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5樓2021-09-26 04:23:17
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3樓2021-09-25 15:44:46
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你用的什么擴(kuò)增菌株？保存在表達(dá)菌株里的質(zhì)粒或你把質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到了表達(dá)菌株，那確實(shí)量少。如果這些信息不清楚，按你現(xiàn)在的做法，準(zhǔn)備個(gè)1.5mLx5或更多的裂解上清，用同一根柱子吸附就行了。另外pw洗過后沒必要放，延長(zhǎng)離心時(shí)間到4分鐘就行了，去酒精效果更好 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2021-09-26 04:20:21
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