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LS-Cui新蟲(chóng) (初入文壇)
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RPA檢測(cè)技術(shù)干貨分享——你想知道的那些事（三）
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今天繼續(xù)分享關(guān)于核酸擴(kuò)增檢測(cè)中一些試劑污染的注意事項(xiàng)，這次來(lái)談?wù)勛畛Ｒ?jiàn)的污染問(wèn)題——?dú)馊苣z污染。 1.什么是氣溶膠 氣溶膠是指懸浮在氣體介質(zhì)中的固態(tài)或液態(tài)顆粒所組成的氣態(tài)分散系統(tǒng)。這些固態(tài)或液態(tài)顆粒的密度與氣體介質(zhì)的密度可以相差微小，也可以懸殊很大。通過(guò)核酸擴(kuò)增的方式進(jìn)行核酸檢測(cè)時(shí)，在操作過(guò)程中容易受到污染，導(dǎo)致假陽(yáng)性的結(jié)果。其中最常見(jiàn)，且最難消除的污染就是氣溶膠污染。 2.氣溶膠是如何產(chǎn)生的 在空氣與液體面摩擦?xí)r就可形成氣溶膠。在操作時(shí)比較劇烈地?fù)u動(dòng)反應(yīng)管，開(kāi)蓋時(shí)、吸樣時(shí)及污染進(jìn)樣槍的反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠而污染。據(jù)計(jì)算，一個(gè)氣溶膠顆�？珊�48000拷貝，因此由其造成的污染是一個(gè)值得特別重視的問(wèn)題。 3.哪些環(huán)節(jié)容易產(chǎn)生氣溶膠 （1） 核酸提取環(huán)節(jié) 這時(shí)候，你所用的移液器是直接吸取核酸溶液的，一些氣溶膠理論上會(huì)進(jìn)入到移液器里，假如你再用這些移液器進(jìn)行核酸擴(kuò)增操作，就有產(chǎn)生氣溶膠污染的可能。 （2）核酸擴(kuò)增結(jié)束，進(jìn)行擴(kuò)增產(chǎn)物電泳時(shí) 這時(shí)候，樣品核酸經(jīng)過(guò)核酸擴(kuò)增反應(yīng)，產(chǎn)物的濃度百萬(wàn)倍增加，移液器吸取擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳，這時(shí)候加樣的移液器百分百會(huì)被氣溶膠污染，假如你用電泳點(diǎn)樣的移液器再去進(jìn)行核酸擴(kuò)增操作，基本上百分百會(huì)污染。 氣溶膠的污染主要發(fā)生在擴(kuò)增產(chǎn)物分析階段，因?yàn)閿U(kuò)增產(chǎn)物拷貝量大（一般為10的13次方拷貝/ml），所以極微量的PCR產(chǎn)物就會(huì)造成假陽(yáng)性。另外，因?yàn)樵诳諝馀c液體面摩擦?xí)r會(huì)形成氣溶膠，所以比較劇烈地?fù)u動(dòng)反應(yīng)管,開(kāi)蓋時(shí)吸樣，以及反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠污染。 核酸氣溶膠污染產(chǎn)生不是瞬間的事情，而是一個(gè)累積的過(guò)程。如果我們?cè)谌粘?shí)驗(yàn)中，就有目地性的規(guī)避，規(guī)范操作，做好清潔消菌，能很大程度上避免核酸氣溶膠污染。 4.當(dāng)污染真的出現(xiàn)時(shí)，該如何有效處理 （1）紫外線處理 由于DNA鏈上相鄰的嘧啶在254 mn紫外誘導(dǎo)下發(fā)生交聯(lián)，嘧啶二聚體不能被切除，導(dǎo)致DNA聚合酶在空間上被阻礙或者DNA不能被完全變性，從而使合成反應(yīng)終止。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，打開(kāi)實(shí)驗(yàn)室各區(qū)域的紫外燈進(jìn)行紫外消毒，照射時(shí)間≥1h，由于小的擴(kuò)增子只有較少的臨近嘧啶，所以該方法對(duì)小的擴(kuò)增子效果不明顯。 （2）次氯酸鈉 次氯酸鈉具有氧化損傷核酸的作用，從而使留在實(shí)驗(yàn)室的擴(kuò)增產(chǎn)物被破壞掉。一般使用10%的次氯酸鈉溶液。操作時(shí)，先用75%酒精對(duì)實(shí)驗(yàn)室空氣進(jìn)行密集噴淋，目的是對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中生成的氣溶膠產(chǎn)生較好的沉降效果。噴淋結(jié)束立即采用次氯酸鈉擦拭工作臺(tái)面/拖擦地面，作用10 min后用清水擦拭工作臺(tái)面，并保持通風(fēng)。 （3）通風(fēng) 如果已經(jīng)發(fā)生污染，一定要做好通風(fēng)，先用酒精或者其他消毒劑在每個(gè)角落噴灑，一定做到無(wú)死角，然后再用市面上的核酸氣溶膠污染清潔劑去噴灑，一樣做到無(wú)死角，再通風(fēng)，擦拭，過(guò)段時(shí)間，再污染監(jiān)控應(yīng)該就差不多了。 核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室污染的防治措施包括但不限于以上幾種，為了避免由于污染造成的假陽(yáng)性等現(xiàn)象，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，檢測(cè)人員應(yīng)嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，把“防污染”貫穿于整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。 |
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