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小小書蟲飛新蟲 (小有名氣)
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[交流]
DNA與RNA提取注意事項(xiàng) 已有1人參與
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1. RNA制備的關(guān)鍵是要抑制細(xì)胞中的RNA分解酶和防止所用器具及試劑中的RNA分解酶的污染。EP管及Tip頭都要用0.1%處理(0.1% DEPC浸泡過夜后高壓蒸氣滅菌)。用于RNA實(shí)驗(yàn)的試劑須使用DEPC水處理滅菌后的玻璃容器盛裝使用的無菌水須用0.1%的DEPC處理后再進(jìn)行高溫高壓滅菌。最好在超凈臺(tái)內(nèi)操作。 2、提取時(shí)操作帶一次性手套、口罩等小心、細(xì)致、晃動(dòng)及每次移液要輕在操作過程中避免講話等。這樣做的唯一目的就是兩個(gè)：一是小心RNAse的污染降解RNA二是動(dòng)作過度暴力破壞RNA的完整性。 3、電泳液需新鮮配制。電泳槽和模具需預(yù)先進(jìn)行處理。 4. 一般RNA電泳應(yīng)該是做甲醛變性電泳，但是一般的瓊脂糖電泳也可以需要上樣量稍微大些并且跑電泳的時(shí)間越短越好(這樣也是為了減少外界RNAse對(duì)RNA的降解)跑完電泳立刻觀察。 5、需要用EB染色，Genefinder染色效果不好，其對(duì)雙鏈DNA的效果好。 6、器材的處理盡量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，應(yīng)在使用前按下列方法進(jìn)行處理。 （1）用0.1% DEPC焦碳酸二乙酯水溶液在37℃下處理12小時(shí)。 （2）然后在120℃下高壓滅菌30分鐘以除去殘留的DEPC。RNA實(shí)驗(yàn)用的器具建議專門使用，不要用于其它實(shí)驗(yàn)。 （轉(zhuǎn)自先達(dá)基因（www.gendx.cn）） |
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2樓2021-01-19 21:50:16
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