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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 核酸提取 » DNA與RNA提取注意事項
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DNA與RNA提取注意事項 已有1人參與
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1. RNA制備的關鍵是要抑制細胞中的RNA分解酶和防止所用器具及試劑中的RNA分解酶的污染。EP管及Tip頭都要用0.1%處理(0.1% DEPC浸泡過夜后高壓蒸氣滅菌)。用于RNA實驗的試劑須使用DEPC水處理滅菌后的玻璃容器盛裝使用的無菌水須用0.1%的DEPC處理后再進行高溫高壓滅菌。最好在超凈臺內(nèi)操作。 2、提取時操作帶一次性手套、口罩等小心、細致、晃動及每次移液要輕在操作過程中避免講話等。這樣做的唯一目的就是兩個：一是小心RNAse的污染降解RNA二是動作過度暴力破壞RNA的完整性。 3、電泳液需新鮮配制。電泳槽和模具需預先進行處理。 4. 一般RNA電泳應該是做甲醛變性電泳，但是一般的瓊脂糖電泳也可以需要上樣量稍微大些并且跑電泳的時間越短越好(這樣也是為了減少外界RNAse對RNA的降解)跑完電泳立刻觀察。 5、需要用EB染色，Genefinder染色效果不好，其對雙鏈DNA的效果好。 6、器材的處理盡量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，應在使用前按下列方法進行處理。 （1）用0.1% DEPC焦碳酸二乙酯水溶液在37℃下處理12小時。 （2）然后在120℃下高壓滅菌30分鐘以除去殘留的DEPC。RNA實驗用的器具建議專門使用，不要用于其它實驗。 （轉自先達基因（www.gendx.cn）） |
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2樓2021-01-19 21:50:16
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