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預期的鏈置換信號放大反應沒有發(fā)生 已有1人參與
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求助各位大佬，本人在做分子信標識別（MB）和信號放大方面的工作，T是靶標核酸鏈，B是理論上能將與MB結合的T替換下來，游離的T再次與MB反應，以實現(xiàn)T的量放大的效果。具體步驟如下： 1、MB探針溶于緩沖溶液（10mM Tris-HCl，2mM EDTA，5mM MgCl2），95℃加熱5min，緩慢冷卻至4℃，得到發(fā)夾狀MB。B直接溶于緩沖溶液備用（10mM Tris-HCl，2mM EDTA）。 2、取MB于PBS溶液中，37℃孵育30min。測定熒光強度記作F0。 3、取MB和T適量于PBS溶液中，37℃孵育30min。測定熒光強度記作F1。 4、取MB和B適量于PBS溶液中，37℃孵育30min。測定熒光強度記作F2。 5、取MB和T適量于PBS溶液中，37℃孵育30min。取出，加入B探針，37℃孵育30min。測定熒光強度記作F3。 以上反應，MB:T:B為10：1：5。 結果發(fā)現(xiàn)熒光強度F0<F1<F2≈F3，理論上F3是明顯大于F2的，不知為何，檢測到的信號強度沒有明顯提高。目前推測是鏈B沒有將T置換以致F2與F3相近，不知各位大佬有無別的看法，或者具體一些的建議？ |
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pennchem
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