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小藝ss新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
預(yù)期的鏈置換信號(hào)放大反應(yīng)沒(méi)有發(fā)生 已有1人參與
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求助各位大佬,本人在做分子信標(biāo)識(shí)別(MB)和信號(hào)放大方面的工作,T是靶標(biāo)核酸鏈,B是理論上能將與MB結(jié)合的T替換下來(lái),游離的T再次與MB反應(yīng),以實(shí)現(xiàn)T的量放大的效果。具體步驟如下: 1、MB探針溶于緩沖溶液(10mM Tris-HCl,2mM EDTA,5mM MgCl2),95℃加熱5min,緩慢冷卻至4℃,得到發(fā)夾狀MB。B直接溶于緩沖溶液備用(10mM Tris-HCl,2mM EDTA)。 2、取MB于PBS溶液中,37℃孵育30min。測(cè)定熒光強(qiáng)度記作F0。 3、取MB和T適量于PBS溶液中,37℃孵育30min。測(cè)定熒光強(qiáng)度記作F1。 4、取MB和B適量于PBS溶液中,37℃孵育30min。測(cè)定熒光強(qiáng)度記作F2。 5、取MB和T適量于PBS溶液中,37℃孵育30min。取出,加入B探針,37℃孵育30min。測(cè)定熒光強(qiáng)度記作F3。 以上反應(yīng),MB:T:B為10:1:5。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)熒光強(qiáng)度F0<F1<F2≈F3,理論上F3是明顯大于F2的,不知為何,檢測(cè)到的信號(hào)強(qiáng)度沒(méi)有明顯提高。目前推測(cè)是鏈B沒(méi)有將T置換以致F2與F3相近,不知各位大佬有無(wú)別的看法,或者具體一些的建議? |
版主 (著名寫(xiě)手)
己所不欲,勿施于人

新蟲(chóng) (初入文壇)
專(zhuān)家顧問(wèn) (正式寫(xiě)手)
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