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小小書蟲飛新蟲 (小有名氣)
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細(xì)胞污染的種類及檢測(cè)方法 已有2人參與
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（一）細(xì)菌、真菌污染的檢測(cè) 1.肉眼觀察 細(xì)菌、真菌污染常在傳代、換液、加樣等開放性操作之后發(fā)生，而且增生迅速，若有污染，在48小時(shí)內(nèi)可明顯觀察到。 2.接種觀察 采用普通肉湯接種或用未加雙抗藥物的培養(yǎng)液接種，也可發(fā)現(xiàn)是否有污染。 3.顯微鏡下觀察 在倒置顯微鏡的高倍鏡下可見培養(yǎng)液中有大量圓球狀顆粒漂浮，即為細(xì)菌污染；若細(xì)胞之間有絲狀、管狀、樹枝狀或卵形的物質(zhì)常為真菌污染。 （二）桿菌污染檢測(cè) 1.顯微鏡下觀察 在倒置顯微鏡的高倍鏡下可見培養(yǎng)液中有大量桿狀游動(dòng)的小蟲子，前期培養(yǎng)液不渾濁，對(duì)各種抗生素?zé)o效，難以清除，換掖沖洗后也無(wú)效。 2.測(cè)序驗(yàn)證 取適量培養(yǎng)液提基因組送測(cè)序，然后分析測(cè)序結(jié)果判斷為桿菌污染。 （三）支原體污染的檢測(cè) 1.顯微鏡觀察 直接取少許培養(yǎng)液滴在載物片上，再蓋上蓋片觀察，支原體在鏡下呈黑色微小顆粒，多位于細(xì)胞與細(xì)胞之間。應(yīng)注意與細(xì)胞破碎溢出的內(nèi)容物如線粒體等區(qū)別開來(lái)。 2.PCR檢測(cè)（MycoTest™ Kit） 利用降落聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)（TD-PCR）對(duì)支原體16S rRNA 基因高度保守區(qū)域特異性片段進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)。如果有支原體污染即可在400～600bp左右能看到一條很亮的條帶。 該方法優(yōu)點(diǎn)：快速，特異性強(qiáng)適用于一般實(shí)驗(yàn)室支原體檢測(cè)預(yù)防。 3.ERA檢測(cè)（先達(dá)基因） 用酶促重組等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（ERA技術(shù)）和單分子熒光檢驗(yàn)技術(shù)（SM@RT），在恒定溫度（37℃）下可對(duì)特異基因進(jìn)行擴(kuò)增及定性檢測(cè)，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光擴(kuò)增曲線，在20分鐘內(nèi)即可判斷樣品中是否含特異基因，檢測(cè)過(guò)程無(wú)需開蓋，避免氣溶膠的產(chǎn)生，結(jié)果可靠性大幅度提高。 4.熒光染色法觀察 用熒光染料與DNA特異地結(jié)合，可使支原體內(nèi)的DNA著色，熒光顯微鏡下支原體成綠色小點(diǎn)，散于細(xì)胞周圍或附于細(xì)胞表面。 5.電鏡檢測(cè) 若條件許可，可用掃描電鏡或投射電鏡觀察。一般在細(xì)胞培養(yǎng)48-72小時(shí)，細(xì)胞接近匯合前，用胰酶消化細(xì)胞制成細(xì)胞懸液后進(jìn)行固定、包埋、切片后才能進(jìn)行觀察。 6.培養(yǎng)檢測(cè) 將細(xì)胞懸液5mL加入45mL支原體肉湯培養(yǎng)基，培養(yǎng)14天后觀察肉湯培養(yǎng)基有無(wú)霧狀沉淀，然后取0.5mL加入已冷卻到50℃的培養(yǎng)基中，再用瓊脂培養(yǎng)基做分離培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)3天觀察有無(wú)“荷包蛋”菌落出現(xiàn)。 （四）黑膠蟲污染的檢測(cè) 1.顯微鏡觀察 在顯微鏡的高倍鏡下可見培養(yǎng)液中有小黑點(diǎn)狀顆粒，并在原點(diǎn)做布朗運(yùn)動(dòng)或震動(dòng)，即為大致判斷為黑膠蟲污染。黑膠蟲比細(xì)胞體積小很多，主要分布在細(xì)胞間隙。 黑膠蟲污染前期細(xì)胞無(wú)明顯變化，培養(yǎng)液中有少許做布朗運(yùn)動(dòng)的小黑點(diǎn)，污染后期小黑點(diǎn)會(huì)迅速增殖導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)裂解死亡。細(xì)胞勤換液可以稍微緩解黑膠蟲增殖速度，但無(wú)法擺脫污染。 2.PCR檢測(cè) 利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)（PCR）對(duì)黑膠蟲基因組進(jìn)行特異性擴(kuò)增檢測(cè)。 4.ERA檢測(cè) 用酶促重組等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（ERA技術(shù)）對(duì)齊基因組進(jìn)行特異性等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè) （五）病毒的檢測(cè) 1.應(yīng)用電鏡技術(shù)快速診斷動(dòng)物病毒病。 2.逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)RT-PCR檢測(cè)病毒。 3.酶促重組等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)病毒。 |
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2樓2020-07-31 20:55:49
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3樓2020-09-16 14:55:51
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