 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1094 | 回復: 3 | ||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
XM沐沐新蟲 (小有名氣)
|
[求助]
關于質(zhì)粒重組，請教大佬們~ 已有2人參與
|
|
| 合成的引物，退火用klenow fragment補齊，酶切后用T4連接酶插入到相同酶切的質(zhì)粒中，通過DH5α轉(zhuǎn)化，沒有菌落長出，是什么問題啊？是質(zhì)粒重組沒有連接上么？ |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有50人回復
-
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
liling0601
銅蟲 (小有名氣)
- 應助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 307.2
- 散金: 34
- 帖子: 148
- 在線: 62.8小時
- 蟲號: 2661775
- 注冊: 2013-09-17
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構與功能
3樓2020-01-17 13:32:24
雨獨步
鐵桿木蟲 (著名寫手)
- 應助: 97 (初中生)
- 金幣: 6668.8
- 散金: 349
- 紅花: 10
- 帖子: 1025
- 在線: 442.3小時
- 蟲號: 1333812
- 注冊: 2011-06-29
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學
2樓2020-01-16 13:03:42
原海亮
木蟲 (著名寫手)
- 應助: 232 (大學生)
- 金幣: 4607.4
- 散金: 3521
- 紅花: 33
- 帖子: 1804
- 在線: 375.4小時
- 蟲號: 1392705
- 注冊: 2011-09-06
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學
【答案】應助回帖
|
導致沒有菌生長的原因有很多，比如，片段酶切處理不完全、載體處理不完全、連接效率過低、感受態(tài)細胞效率低下等等。如果想找到原因還是建議做一些對照實驗，比如可以用空載轉(zhuǎn)感受態(tài)，驗證感受態(tài)細胞效率，通過載體自連轉(zhuǎn)化驗證載體處理效果等。 大家經(jīng)常面對的是假陽性比較多，即載體自連。對于樓主出現(xiàn)的連一個菌都不長的情況，首先確定平板抗性正確，然后使用空載體進行轉(zhuǎn)化，驗證感受態(tài)細胞的效率，當然如果感受態(tài)細胞其他人用著可以，那就不用做該對照。 不太清楚樓主的實驗目的，描述的比較簡單，且“合成的引物，退火用klenow fragment補齊”是pcr擴增基因產(chǎn)物？我沒做過，所以不太清楚表達的意思。 其實轉(zhuǎn)化的主要因素就是：片段、載體、連接體系 pcr片段進行酶切時候，最容易出現(xiàn)酶切不完全的情況，因為切下來的堿基少，電泳無法分辨�？梢钥紤]連接T載體后，提取質(zhì)粒進行酶切，這樣可以通過電泳檢測片段是否酶切完全。 載體也同樣存在酶切是否完全的問題，特別雙酶切的時候，很多判斷是否兩個酶都酶切完全。這時候我們一般會適當?shù)脑黾用噶亢蜁r間，但這一般不會導致一個菌都不長，會出現(xiàn)載體自連情況。 接下來就是連接，我建議在進行片段和載體連接前，一定進行電泳檢測你的片段和載體濃度，因為我們之前就出現(xiàn)過，對片段載體膠回收后進行連接效率很低，后來發(fā)現(xiàn)回收的片段濃度電泳都看不到，所以根據(jù)經(jīng)驗，還是做個電泳檢測，如果片段濃度可以，那就盡量多的加入片段，載體有一點即可，可以增加轉(zhuǎn)化子的陽性數(shù)。 |
4樓2020-04-08 14:26:18
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 化工284求調(diào)劑 +10 | 小黑想變白 2026-03-07 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[碩博家園] 2026級碩士研究生招生/調(diào)劑 +4 | lbj6746988 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑（085602一志愿985） +4 | 化工人999 2026-03-09 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料與化工 一志愿山大 321分 求調(diào)劑 +4 | 每天散步 2026-03-09 | 5/250 |
|
|
|
[考博] 申博 +5 | 添菜了哈 2026-03-04 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 293一志愿華東理工 0817化學工程與技術 調(diào)劑 +5 | fjj0912 2026-03-07 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 醫(yī)學檢驗專業(yè)26考研求調(diào)劑 +3 | 琪ya 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿中科大能動297求調(diào)劑，本科川大 +4 | 邵11 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0701-322 求調(diào)劑 +3 | jiliuxian 2026-03-06 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 322分 085600求調(diào)劑，有互聯(lián)網(wǎng)+國金及主持省級大創(chuàng)經(jīng)歷 +4 | 熊境喆 2026-03-05 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 070300化學求調(diào)劑292分 +3 | 打烊eee 2026-03-07 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿中國石油大學（華東） 本科齊魯工業(yè)大學 求調(diào)劑 +3 | snw石 2026-03-07 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿中石油，化學工程，301求調(diào)劑 +4 | 豚饅枳枳 2026-03-04 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +6 | vuzhdkfjkx 2026-03-04 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +4 | L9370 2026-03-05 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 267調(diào)劑求助 +5 | 聰少OZ 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學 一志愿東北大學 279分求調(diào)劑 +4 | 聶樂平 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085601 材料305分求助 +4 | 泡泡郵件 2026-03-03 | 6/300 |
|
|
|
[考研]
 0703化學學碩 288分
+4
|
旅行中的紫葡萄 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 306求調(diào)劑 +7 | 張張張張oo 2026-03-03 | 7/350 |
|