 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2585 | 回復(fù): 10 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
夏夏Dana新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
PCR擴增一直失敗 已有1人參與
|
|
|
1、篩選到的菌株，NCBI鑒定菌種類型，最大相似度到達92%，查找目的基因根據(jù)ORF框設(shè)計引物，目標(biāo)片段1400多bp，一直擴增不出來。 2、一個菌株中，編碼同一個酶的基因有三種，僅擴增出一個，另外兩個一直擴增失敗。 請問如何優(yōu)化? |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有153人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
woshishui916
木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 15 (小學(xué)生)
- 金幣: 8212.4
- 散金: 70
- 紅花: 3
- 帖子: 1800
- 在線: 301.9小時
- 蟲號: 335922
- 注冊: 2007-03-31
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物遺傳學(xué)
9樓2019-10-25 20:33:53
woshishui916
木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 15 (小學(xué)生)
- 金幣: 8212.4
- 散金: 70
- 紅花: 3
- 帖子: 1800
- 在線: 301.9小時
- 蟲號: 335922
- 注冊: 2007-03-31
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物遺傳學(xué)
2樓2019-10-21 21:15:12
3樓2019-10-22 14:34:16
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
|
樓主你好，根據(jù)你的描述，我建議你首先檢查引物。 可以使用NCBI的primer-BLAST來評價你設(shè)計的引物是否足夠好。 如果引物的特異性沒有問題，并且不存在形成引物二聚體的問題，那么你需要考慮你是否使用了適合你引物的退火溫度。 一對好的引物，它們的Tm相差不大于5，并且GC含量相似（如果你加了限制性酶切位點，也要考慮進去）。一般的退火溫度是引物的Tm－5。 其次，你還需要檢查延伸時間。根據(jù)不同的聚合酶，它們的擴增速度不同，你需要根據(jù)你的目的片段的長度調(diào)整延伸時間。以上兩點可以參考你使用的聚合酶說明書來進行調(diào)整。 如果你有陽性對照的話（即提取自你BLAST匹配到的菌種的DNA），還可以試著做一個溫度梯度PCR，來測試不同的退火溫度，選擇其中更適合你的引物的條件。 此外，你說到“編碼同一個酶的基因有三種，僅擴增出一個”，意思是同一個物種當(dāng)中有三個等位基因？ 它們的CDS序列兩端一樣嗎？如果不一樣需要根據(jù)不同的基因設(shè)計不同的引物。 預(yù)祝你成功。  有問題歡迎繼續(xù)交流 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
夏夏Dana
4樓2019-10-23 20:01:55
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 346分材料求調(diào)劑 +3 | snow_反季節(jié)版 2026-03-07 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[碩博家園] 售瀆SCI文章，我:8⊙ 55 1⊙ 54。備注【⊙=0】 +4 | vs9ky3szrj 2026-03-06 | 6/300 |
|
|
[考研] 322分 085600求調(diào)劑，有互聯(lián)網(wǎng)+國金及主持省級大創(chuàng)經(jīng)歷 +3 | 熊境喆 2026-03-05 | 3/150 |
|
|
|
[教師之家] 售SCI一區(qū)T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齊全,可+急 +3 | 7mzg0e04z2 2026-03-06 | 5/250 |
|
|
|
[找工作] 售瀆SCI文章，我:8⊙ 55 1⊙ 54。備注【⊙=0】 +4 | ipys00zm58 2026-03-06 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 298 調(diào)劑 +11 | 小西笑嘻嘻 2026-03-03 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑推薦 +4 | 微辣不吃 2026-03-06 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 一志愿蘇州大學(xué)，0856化工323分 | 本科應(yīng)化 | 有專利/競賽/科研助手經(jīng)歷 | +5 | 橙子cyx 2026-03-06 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿中石油，化學(xué)工程，301求調(diào)劑 +4 | 豚饅枳枳 2026-03-04 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 誠求調(diào)劑，323分 有專利/科研/實習(xí)經(jīng)歷 +5 | 橙子cyx 2026-03-06 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工，一志愿廣州985，求調(diào)劑 +10 | qqyyaill 2026-03-05 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)專業(yè)調(diào)劑 +5 | 好好好1233 2026-03-04 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿蘇大材料工程專碩293求調(diào)劑 +3 | 鋼鐵大炮 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩080500復(fù)試調(diào)劑294 +3 | 四葉zjz 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料復(fù)試調(diào)劑 +7 | 學(xué)材料的點 2026-03-01 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué) 一志愿東北大學(xué) 279分求調(diào)劑 +4 | 聶樂平 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085600 材料與化工 298 +14 | 小西笑嘻嘻 2026-03-03 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 一志愿西交大材料學(xué)碩 346 求調(diào)劑 +3 | zju51 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)，材料，環(huán)境類求調(diào)劑 +7 | 考研版棒棒 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +3 | 熊境喆 2026-03-01 | 3/150 |
|