 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門(mén)版塊排行榜 |
- >論壇更新日志 (1714)
- >導(dǎo)師招生 (141)
- >考研 (129)
- >蟲(chóng)友互識(shí) (62)
- >基金申請(qǐng) (37)
- >考博 (29)
- >休閑灌水 (24)
- >論文投稿 (20)
- >教師之家 (18)
- >公派出國(guó) (15)
- >找工作 (14)
- >論文道賀祈福 (10)
- >碩博家園 (9)
- >博后之家 (8)
- >文獻(xiàn)求助 (4)
- >藥品生產(chǎn) (2)
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 2572 | 回復(fù): 10 | ||
夏夏Dana新蟲(chóng) (初入文壇)
|
[求助]
PCR擴(kuò)增一直失敗 已有1人參與
|
|
|
1、篩選到的菌株，NCBI鑒定菌種類型，最大相似度到達(dá)92%，查找目的基因根據(jù)ORF框設(shè)計(jì)引物，目標(biāo)片段1400多bp，一直擴(kuò)增不出來(lái)。 2、一個(gè)菌株中，編碼同一個(gè)酶的基因有三種，僅擴(kuò)增出一個(gè)，另外兩個(gè)一直擴(kuò)增失敗。 請(qǐng)問(wèn)如何優(yōu)化? |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有62人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
|
樓主你好，根據(jù)你的描述，我建議你首先檢查引物。 可以使用NCBI的primer-BLAST來(lái)評(píng)價(jià)你設(shè)計(jì)的引物是否足夠好。 如果引物的特異性沒(méi)有問(wèn)題，并且不存在形成引物二聚體的問(wèn)題，那么你需要考慮你是否使用了適合你引物的退火溫度。 一對(duì)好的引物，它們的Tm相差不大于5，并且GC含量相似（如果你加了限制性酶切位點(diǎn)，也要考慮進(jìn)去）。一般的退火溫度是引物的Tm－5。 其次，你還需要檢查延伸時(shí)間。根據(jù)不同的聚合酶，它們的擴(kuò)增速度不同，你需要根據(jù)你的目的片段的長(zhǎng)度調(diào)整延伸時(shí)間。以上兩點(diǎn)可以參考你使用的聚合酶說(shuō)明書(shū)來(lái)進(jìn)行調(diào)整。 如果你有陽(yáng)性對(duì)照的話（即提取自你BLAST匹配到的菌種的DNA），還可以試著做一個(gè)溫度梯度PCR，來(lái)測(cè)試不同的退火溫度，選擇其中更適合你的引物的條件。 此外，你說(shuō)到“編碼同一個(gè)酶的基因有三種，僅擴(kuò)增出一個(gè)”，意思是同一個(gè)物種當(dāng)中有三個(gè)等位基因？ 它們的CDS序列兩端一樣嗎？如果不一樣需要根據(jù)不同的基因設(shè)計(jì)不同的引物。 預(yù)祝你成功。  有問(wèn)題歡迎繼續(xù)交流 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
夏夏Dana
4樓2019-10-23 20:01:55
8樓2019-10-25 18:40:48
woshishui916
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 15 (小學(xué)生)
- 金幣: 8212.4
- 散金: 70
- 紅花: 3
- 帖子: 1800
- 在線: 301.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 335922
- 注冊(cè): 2007-03-31
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物遺傳學(xué)
2樓2019-10-21 21:15:12
3樓2019-10-22 14:34:16
夏夏Dana
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 13
- 帖子: 7
- 在線: 2.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 14862102
- 注冊(cè): 2019-04-12
- 專業(yè): 生物化學(xué)
5樓2019-10-25 14:54:57
夏夏Dana
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 13
- 帖子: 7
- 在線: 2.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 14862102
- 注冊(cè): 2019-04-12
- 專業(yè): 生物化學(xué)
6樓2019-10-25 14:57:20
夏夏Dana
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 13
- 帖子: 7
- 在線: 2.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 14862102
- 注冊(cè): 2019-04-12
- 專業(yè): 生物化學(xué)
7樓2019-10-25 15:00:17
woshishui916
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 15 (小學(xué)生)
- 金幣: 8212.4
- 散金: 70
- 紅花: 3
- 帖子: 1800
- 在線: 301.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 335922
- 注冊(cè): 2007-03-31
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物遺傳學(xué)
9樓2019-10-25 20:33:53
Explor
新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 10 (幼兒園)
- 金幣: 1554.8
- 散金: 88
- 紅花: 2
- 帖子: 775
- 在線: 168.8小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 8160133
- 注冊(cè): 2018-03-05
- 專業(yè): 生物化學(xué)
10樓2019-11-01 09:19:48
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 夏夏Dana 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 332材料求調(diào)劑 +6 | zjy101327 2026-03-05 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +5 | ws 上岸鴨 2026-03-05 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +5 | Bananaiy 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境工程專碩307 一志愿211 四六級(jí)已過(guò) 求調(diào)劑 +5 | ccc! 2026-03-03 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 化學(xué) 0703求調(diào)劑 總分293 一志愿211 +9 | 土土小蟲(chóng) 2026-03-03 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 298 調(diào)劑 +9 | 小西笑嘻嘻 2026-03-03 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 267化工調(diào)劑求助 +5 | 聰少OZ 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +7 | 哇塞王帥 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 學(xué)碩材料275調(diào)劑 +9 | 路三三 2026-03-03 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +4 | 小賽不吃香菜 2026-03-04 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
085600 英一數(shù)二272求調(diào)劑
 5+6
|
vida_a 2026-03-01 | 47/2350 |
|
|
|
[考研] 322,求調(diào)劑 +3 | 菜菜愛(ài)玩 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿中科大能動(dòng)297求調(diào)劑，本科川大 +3 | 邵11 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑一志愿東北林業(yè)大學(xué)材料與化工英二數(shù)二 +5 | 蟲(chóng)蟲(chóng)蟲(chóng)蟲(chóng)蟲(chóng)7 2026-03-01 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑。一志愿報(bào)考鄭州大學(xué)化學(xué)工藝學(xué)碩，總分295分 +8 | yl1 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料085601調(diào)劑 +5 | 多多子. 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考博] 誠(chéng)招農(nóng)業(yè)博士 +3 | 心欣向榮 2026-02-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 291 求調(diào)劑 +3 | 化工2026屆畢業(yè)?/a> 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +6 | 愛(ài)擦汗的可樂(lè)冰 2026-02-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +6 | 亭亭亭01 2026-03-01 | 6/300 |
|