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周霸霸霸新蟲 (小有名氣)
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質(zhì)粒大提加入異丙醇沒有沉淀 已有1人參與
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今天用QIAGEN 的MEGA 試劑盒做了大提，在洗脫液加入異丙醇后可以見到有玻璃狀的東西漂浮，然后我在4度冰箱里放置了大概兩個(gè)多小時(shí)后再12000rpm ，30min，4度 離心后管壁什么都沒有，我把液體倒出來看也沒看到有沉淀，之后用70%乙醇洗滌同樣條件離心后發(fā)現(xiàn)也什么都沒有，想請問問題到底出在哪里呢？查了資料也看到說是因?yàn)槲业漠惐己臀业南疵撘簺]有混勻，但也不可能一點(diǎn)沉淀也沒有吧，這個(gè)是否和離心管也有關(guān)？我用的高速離心用的圓底的厚壁離心管，加上異丙醇沉淀的質(zhì)粒DNA 本身就是吸附不牢靠所以被倒出來了，不過我在我倒出來的液體里也真沒看到任何沉淀物，或者是我洗脫的質(zhì)粒DNA 量本來就不夠？！這個(gè)試劑盒的過柱太麻煩了，做了一天沒有東西希望大家提點(diǎn)意見！卑微.jpg 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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周霸霸霸
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2樓2019-09-27 22:44:02
gfgva
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2019-09-28 22:47:12
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2019-09-28 22:47:12
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你的菌沒問題吧，用試劑盒一般都沒什么問題啊，小提能提出來不，要不換個(gè)試劑盒試試？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2019-09-28 04:36:59
huimukao
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4樓2019-09-28 09:11:14
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菌我覺得有問題當(dāng)時(shí)小搖后換大搖是500ml LB 加到500ml錐形瓶里，離心后菌液沉淀大概1.6g/L ，顏色也是灰棕色的那種，之前用這個(gè)菌中提產(chǎn)量還是可以的。 試劑盒……過期了的，不過我用P 1，P2，P3感覺是有用的，我懷疑是洗脫DNA 那里的buffer 有問題 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
5樓2019-09-28 09:21:34
周霸霸霸
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6樓2019-09-28 09:23:50
huimukao
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7樓2019-09-28 09:33:39
gfgva
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2019-09-28 22:47:25
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要不你試試小提的試劑盒怎么樣，有可能你的菌被污染了，帶目的質(zhì)粒的已經(jīng)不是優(yōu)勢菌種了，或者忘加抗生素了？不確定的試劑還是別用了，做實(shí)驗(yàn)可不能圖省錢啊，時(shí)間浪費(fèi)不起 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2019-09-28 09:35:33
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抗生素Amp 肯定是按照平常的1‰加了的，我覺得可能是我的培養(yǎng)錐形瓶體積太小了，導(dǎo)致菌缺氧都死了  你說得對，不能圖省錢，實(shí)驗(yàn)時(shí)間浪費(fèi)不起  發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
9樓2019-09-29 10:41:18
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