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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 核酸提取 » 質粒大提加入異丙醇沒有沉淀
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周霸霸霸新蟲 (小有名氣)
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質粒大提加入異丙醇沒有沉淀 已有1人參與
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今天用QIAGEN 的MEGA 試劑盒做了大提，在洗脫液加入異丙醇后可以見到有玻璃狀的東西漂浮，然后我在4度冰箱里放置了大概兩個多小時后再12000rpm ，30min，4度 離心后管壁什么都沒有，我把液體倒出來看也沒看到有沉淀，之后用70%乙醇洗滌同樣條件離心后發(fā)現也什么都沒有，想請問問題到底出在哪里呢？查了資料也看到說是因為我的異丙醇和我的洗脫液沒有混勻，但也不可能一點沉淀也沒有吧，這個是否和離心管也有關？我用的高速離心用的圓底的厚壁離心管，加上異丙醇沉淀的質粒DNA 本身就是吸附不牢靠所以被倒出來了，不過我在我倒出來的液體里也真沒看到任何沉淀物，或者是我洗脫的質粒DNA 量本來就不夠？！這個試劑盒的過柱太麻煩了，做了一天沒有東西希望大家提點意見！卑微.jpg 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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周霸霸霸
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2樓2019-09-27 22:44:02
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你的菌沒問題吧，用試劑盒一般都沒什么問題啊，小提能提出來不，要不換個試劑盒試試？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2019-09-28 04:36:59
huimukao
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4樓2019-09-28 09:11:14
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菌我覺得有問題當時小搖后換大搖是500ml LB 加到500ml錐形瓶里，離心后菌液沉淀大概1.6g/L ，顏色也是灰棕色的那種，之前用這個菌中提產量還是可以的。 試劑盒……過期了的，不過我用P 1，P2，P3感覺是有用的，我懷疑是洗脫DNA 那里的buffer 有問題 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
5樓2019-09-28 09:21:34
周霸霸霸
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6樓2019-09-28 09:23:50
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7樓2019-09-28 09:33:39
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要不你試試小提的試劑盒怎么樣，有可能你的菌被污染了，帶目的質粒的已經不是優(yōu)勢菌種了，或者忘加抗生素了？不確定的試劑還是別用了，做實驗可不能圖省錢啊，時間浪費不起 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2019-09-28 09:35:33
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9樓2019-09-29 10:41:18
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10樓2019-10-28 11:26:33
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