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菱霖飛飛飛新蟲 (初入文壇)
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GST標(biāo)簽融合蛋白純化所用的binding buffer以及elution buffer中DTT如何加？
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GST純化柱的protocol中顯示的結(jié)合緩沖液為PBS，洗脫緩沖液則為pH=8.0 50mM Tris-HCl +10mM 還原型谷胱甘肽。 其中，注意事項原文是這么說的：結(jié)合緩沖液或者洗脫緩沖液中可加入1-10mM DTT。這句話意思是說結(jié)合緩沖液或者洗脫緩沖液兩者選其一加DTT嗎？，若只在洗脫緩沖液中加DTT，會不會對還原性谷胱甘肽有影響？大家這種情況下一般是怎么使用DTT的呢？ 另外，洗脫緩沖液可以由tris-hcl改為在PBS中加入10mM 還原型谷胱甘肽嗎？因為用tris-hcl作儲存液純化得到的蛋白做EMSA實驗結(jié)合不是很明顯。 |
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