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學(xué)而不思則惘新蟲(chóng) (初入文壇)
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關(guān)于無(wú)縫克隆的問(wèn)題 已有9人參與
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嗯本人研一實(shí)驗(yàn)室小白一枚，因?yàn)槭切陆⒌膶?shí)驗(yàn)室，也木的師兄師姐帶，所以來(lái)這里求助一下，順便分享下我的經(jīng)驗(yàn) 老師讓我把一個(gè)13000的基因搞到手 我搞了八個(gè)月了，先是分成七段，拿提的cdna當(dāng)模板p，這些都是小事，后來(lái)的拼接最開(kāi)始用的圣羽的，挺得勁把2+3連起來(lái)了，再后來(lái)就死活做不出來(lái)，做了各種對(duì)照，覺(jué)得是試劑盒的問(wèn)題，就換了諾唯贊的，后來(lái)就把2+3 4+5 6+7都連起來(lái)了，然后連2+3+4+5用的感受態(tài)還是自己實(shí)驗(yàn)室做的dh5，挑菌用第三段尾端設(shè)計(jì)了個(gè)引物，第四段開(kāi)始設(shè)計(jì)了個(gè)引物，跑出來(lái)500bp的帶，也挑出來(lái)了。接下來(lái)就是1+2+3連起來(lái)，然后用當(dāng)時(shí)2+3+4+5連接時(shí)的同源臂，順利的把1+2+3+4+5連起來(lái)了，測(cè)序也對(duì)了。 現(xiàn)在的問(wèn)題是我用諾唯贊的試劑盒死活做不出來(lái)了，簡(jiǎn)單的4+5+6+7都連不起來(lái)，同樣的手法，操作，感受態(tài)換成了買的也是不行，一個(gè)多月了，本來(lái)已經(jīng)想好方法只要把4567連上，我就有能力把1234567連上，但是現(xiàn)在做不出來(lái)，誰(shuí)最近做過(guò)無(wú)縫克隆，有推薦的做出來(lái)的試劑盒沒(méi)？neb的就算了，也買了做不出來(lái)。我可以分享我目前的經(jīng)驗(yàn)。 目前就是9200片段+5000pcdna3.1測(cè)序正確 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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