 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 8419 | 回復(fù): 13 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
學(xué)而不思則惘新蟲 (初入文壇)
|
[交流]
關(guān)于無縫克隆的問題 已有9人參與
|
||
|
嗯本人研一實驗室小白一枚，因為是新建立的實驗室，也木的師兄師姐帶，所以來這里求助一下，順便分享下我的經(jīng)驗 老師讓我把一個13000的基因搞到手 我搞了八個月了，先是分成七段，拿提的cdna當(dāng)模板p，這些都是小事，后來的拼接最開始用的圣羽的，挺得勁把2+3連起來了，再后來就死活做不出來，做了各種對照，覺得是試劑盒的問題，就換了諾唯贊的，后來就把2+3 4+5 6+7都連起來了，然后連2+3+4+5用的感受態(tài)還是自己實驗室做的dh5，挑菌用第三段尾端設(shè)計了個引物，第四段開始設(shè)計了個引物，跑出來500bp的帶，也挑出來了。接下來就是1+2+3連起來，然后用當(dāng)時2+3+4+5連接時的同源臂，順利的把1+2+3+4+5連起來了，測序也對了。 現(xiàn)在的問題是我用諾唯贊的試劑盒死活做不出來了，簡單的4+5+6+7都連不起來，同樣的手法，操作，感受態(tài)換成了買的也是不行，一個多月了，本來已經(jīng)想好方法只要把4567連上，我就有能力把1234567連上，但是現(xiàn)在做不出來，誰最近做過無縫克隆，有推薦的做出來的試劑盒沒？neb的就算了，也買了做不出來。我可以分享我目前的經(jīng)驗。 目前就是9200片段+5000pcdna3.1測序正確 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有89人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
學(xué)而不思則惘
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 31.8
- 帖子: 10
- 在線: 2.8小時
- 蟲號: 6485145
- 注冊: 2017-05-09
- 專業(yè): 發(fā)育生物學(xué)
4樓2019-08-15 09:59:15
金平果
新蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 4586.5
- 紅花: 5
- 沙發(fā): 4
- 帖子: 1682
- 在線: 171.9小時
- 蟲號: 6557232
- 注冊: 2017-05-18
- 專業(yè): 生物化學(xué)
2樓2019-08-14 23:07:17
wuhu0612331
銅蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 3526.1
- 散金: 221
- 紅花: 16
- 帖子: 999
- 在線: 159.1小時
- 蟲號: 3232337
- 注冊: 2014-05-25
- 性別: GG
- 專業(yè): 免疫生物學(xué)
3樓2019-08-15 09:32:17
。 5樓2019-08-15 15:19:49
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 歡迎211本科同學(xué)，過A區(qū)國家線，A區(qū)非偏遠一本，交叉學(xué)科課題組 +14 | lisimayy 2026-03-04 | 24/1200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 332材料求調(diào)劑 +6 | zjy101327 2026-03-05 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑 +5 | 呼呼？~+123456 2026-03-05 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085602 293分求調(diào)劑 +3 | SivanNano. 2026-03-05 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境工程專碩307 一志愿211 四六級已過 求調(diào)劑 +5 | ccc! 2026-03-03 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué) 280 一志愿太原理工 求調(diào)劑 +8 | 拾玖壹 2026-03-04 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 376求調(diào)劑 +3 | 王浩然sam 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑，總分320分，一志愿中南民族大學(xué) +3 | 19286712440 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | 博斯特525 2026-03-04 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué) 一志愿東北大學(xué) 279分求調(diào)劑 +4 | 聶樂平 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿中科大080500總分324求調(diào)劑 +3 | jorna 2026-03-03 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +4 | 小賽不吃香菜 2026-03-04 | 4/200 |
|
|
|
[考博] 26申博 +5 | north， 2026-02-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境工程學(xué)碩288求助調(diào)劑 +7 | 多吃億口芝士 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 276求調(diào)劑 +8 | 路lyh123 2026-02-28 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 0805總分292，求調(diào)劑 +12 | 幻想之殤 2026-03-01 | 12/600 |
|
|
|
[考研]
 高分子化學(xué)與物理調(diào)劑
+6
|
好好好1233 2026-02-28 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 264求調(diào)劑 +4 | 巴拉巴拉根556 2026-02-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料類求調(diào)劑 +11 | wana_kiko 2026-02-28 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +6 | 亭亭亭01 2026-03-01 | 6/300 |
|