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學(xué)而不思則惘新蟲 (初入文壇)
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[交流]
關(guān)于無縫克隆的問題 已有9人參與
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嗯本人研一實驗室小白一枚，因為是新建立的實驗室，也木的師兄師姐帶，所以來這里求助一下，順便分享下我的經(jīng)驗 老師讓我把一個13000的基因搞到手 我搞了八個月了，先是分成七段，拿提的cdna當(dāng)模板p，這些都是小事，后來的拼接最開始用的圣羽的，挺得勁把2+3連起來了，再后來就死活做不出來，做了各種對照，覺得是試劑盒的問題，就換了諾唯贊的，后來就把2+3 4+5 6+7都連起來了，然后連2+3+4+5用的感受態(tài)還是自己實驗室做的dh5，挑菌用第三段尾端設(shè)計了個引物，第四段開始設(shè)計了個引物，跑出來500bp的帶，也挑出來了。接下來就是1+2+3連起來，然后用當(dāng)時2+3+4+5連接時的同源臂，順利的把1+2+3+4+5連起來了，測序也對了。 現(xiàn)在的問題是我用諾唯贊的試劑盒死活做不出來了，簡單的4+5+6+7都連不起來，同樣的手法，操作，感受態(tài)換成了買的也是不行，一個多月了，本來已經(jīng)想好方法只要把4567連上，我就有能力把1234567連上，但是現(xiàn)在做不出來，誰最近做過無縫克隆，有推薦的做出來的試劑盒沒？neb的就算了，也買了做不出來。我可以分享我目前的經(jīng)驗。 目前就是9200片段+5000pcdna3.1測序正確 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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