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膠回收后測序提示有高級結構
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對PCR凝膠電泳使用天根生物試劑盒進行膠回收，回收后送去測序，結果顯示雙鏈有高級結構，一共測序4個樣，3個樣雙鏈有高級結構，一個單鏈有高級結構。之前不做膠回收直接將pcr樣品測序，從來沒有出現過這個情況。請問是不是膠回收過程導致這個結果，哪個步驟容易出現dna結構變化 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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7樓2019-10-10 09:34:18
hooah
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2樓2019-07-22 12:51:27
longyueling
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3樓2019-08-07 16:30:40
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最近又進行了兩次實驗，膠回收之后跑電泳條帶很亮位置也正常，送樣測序后顯示27 F的單鏈全是高級結構，懷疑是不是引物的問題，如果引物稀釋沒有使用新打的去離子水，會有這么大的影響嗎？另外引物干粉有可能超過1年了，但是反向引物也是同時合成的呀，為什么反向的測序結果正常呢，焦頭爛額中，還望您不吝賜教，謝謝。另外我們PCR的體系是50微升的，從電泳條帶亮度看這個量回收得到的產物濃度沒有問題 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
4樓2019-08-19 11:37:09
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