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求助啟動子構(gòu)建載體問題 已有1人參與
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| 求助大家!!我目前在克隆啟動子,好不容易P出了2600bp左右的條帶,回收之后構(gòu)建到PBI121和PAbAi載體上,重復(fù)做了不少于20次,都能長出菌斑,但是鑒定都沒有陽性克隆。我檢查了回收的片段產(chǎn)物,酶切產(chǎn)物都沒有問題,也試過了不同的比例(片段產(chǎn)物/酶切產(chǎn)物),但還是沒有用。但這是我的畢業(yè)課題,也不能一直拖著吧,然后找生物公司幫忙做,他們看了我的序列說是靠近CDS區(qū)域的序列AT含量太高,GC含量低,并且是構(gòu)建到低拷貝載體上,不容易做,但他們做了半個月了,也沒啥動靜,簡直是急死我了。。。!,F(xiàn)在不知道要咋辦了,所以請大家?guī)臀铱匆幌,有什么辦法解決沒有。不勝感激。! |
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