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星星不太萌新蟲 (小有名氣)
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[求助]
構(gòu)建載體 已有1人參與
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載體和目的片段連接好后，挑陽性克隆菌落，PCR驗(yàn)證有目的條帶，酶切驗(yàn)證卻切不下來，送PCR產(chǎn)物，測序結(jié)果顯示目的序列在，就是酶切不下來，請教各位大神，這是什么原因呢？ @wizardfan @biostar2009 @youlinglyw @飛約瘋?cè)嗽?/u> @飛約瘋?cè)嗽?/u> 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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Esther_Young
銅蟲 (小有名氣)
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星星不太萌(淵博震天代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)積極回帖 2019-03-03 16:34:03
星星不太萌(淵博震天代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)積極回帖 2019-03-03 16:34:03
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1. 內(nèi)切酶或者buffer的問題（不過你目的基因和載體都切好了證明沒問題）；2.質(zhì)粒提取濃度低或者質(zhì)量不好（搖菌8小時(shí)以上再提質(zhì)粒，可以適當(dāng)加大菌液使用量）；3.直接送質(zhì)粒去測序 進(jìn)行驗(yàn)證 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
2樓2019-03-03 02:01:59
星星不太萌
新蟲 (小有名氣)
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一般質(zhì)粒提取的濃度8ml菌液可以提300多ng/ul，還是直接送質(zhì)粒測序比較可靠，菌液PCR和提質(zhì)粒PCR跑出來的條帶不一樣。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2019-03-03 09:27:44
4樓2019-03-04 08:16:26
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