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反轉(zhuǎn)錄制備cDNA
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| 以RNA為模板制備的cDNA是單鏈的，接下來要做熒光定量PCR，需要以cDNA為模板合成第二鏈嗎？如果不需要的話那qPCR的模板就只有一條鏈，設(shè)計(jì)目的基因和內(nèi)參基因引物的時(shí)候只設(shè)計(jì)一個(gè)引物嗎？我覺得有點(diǎn)怪怪的，不知道我什么地方理解有問題，希望能有詳細(xì)的解答，真心謝謝大家 |
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淵博震天: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2019-02-04 16:54:57
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這個(gè)不需要合成第二鏈的。rna反轉(zhuǎn)的cdna本來就是混合池，里面在反轉(zhuǎn)的過程中已經(jīng)有的第二鏈的存在。設(shè)計(jì)相關(guān)基因的引物的時(shí)候，是一對引物，通常都是根據(jù)相關(guān)基因的一條鏈設(shè)計(jì)的，另外一條之后反向互補(bǔ)，這一對引物也是可以擴(kuò)增出來的。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2019-01-31 00:36:51
kangaroo0513
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3樓2019-02-01 07:36:57
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反轉(zhuǎn)過程中，已經(jīng)被反轉(zhuǎn)出來的單鏈，也會(huì)被當(dāng)成模板進(jìn)行下一次的反轉(zhuǎn) 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2019-02-01 08:38:47
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5樓2019-02-06 11:43:34
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