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draxlx新蟲 (小有名氣)
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[求助]
構(gòu)建且成功表達過的重組質(zhì)粒 復(fù)測數(shù)據(jù)時不表達了 已有1人參與
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各位大佬,誠心求助。 4月份的時候,我用無縫克隆技術(shù)構(gòu)建了一個 "目的基因+耐熱基因+表達載體" 的重組質(zhì)粒 ,成功表達了“目的基因+耐熱基因”的融合蛋白,測其酶學(xué)特性顯示 :融合蛋白比野生酶在溫度穩(wěn)定性方面有了極大改善。 現(xiàn)在7月份,我用當初保藏的菌種 再次擴培、破胞、純化,復(fù)測其溫度穩(wěn)定性,發(fā)現(xiàn)與野生酶一樣,重復(fù)不出當初的數(shù)據(jù)。 跑過菌液電泳,確實是重組質(zhì)粒的菌液沒有拿錯。 又跑了蛋白膠,結(jié)果沒有融合蛋白的表達條帶,反而有野生酶的表達條帶。(怪不得復(fù)測的時候,融合蛋白與野生酶的數(shù)據(jù)幾乎一模一樣,差別十分微。 有沒有朋友出現(xiàn)過這種情況啊? (4月份所測的數(shù)據(jù)是沒有錯的,因為當時短時間內(nèi)有3個人都測了,三個人測出來的數(shù)據(jù)是高度統(tǒng)一的。) |
專家顧問 (正式寫手)
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新蟲 (小有名氣)
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