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C12ire1新蟲 (初入文壇)
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雙酶切求助！ 已有2人參與
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雙酶切后載體條帶很淺 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容是載體和插入片段同時(shí)酶切過夜，用的EcoRI和BamHI，片段和載體都是50體系，且都加了500ng,試過把載體加到1000ng，跑出來的條帶是插入片段是亮的，載體條帶很淺，幾乎看不見，測了濃度是載體酶切后在1-2ng/ul,反復(fù)酶切過幾次都是這種結(jié)果，片段是1500bp，載體是改造載體1.6kb求大佬解答！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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2樓2023-05-11 10:37:14
3樓2023-05-11 11:53:23
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其實(shí)我后面已經(jīng)重轉(zhuǎn)過了，結(jié)果也是差不多，就是感覺載體有問題，但不知道問題在哪兒，后續(xù)用酶切產(chǎn)物直接回收，沒有跑膠，得到過7-8ng/ul的濃度做了轉(zhuǎn)化，但沒有得到陽性菌 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2023-05-11 16:25:39
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5樓2023-05-11 16:27:09
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6樓2023-05-11 19:20:49
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7樓2023-05-11 19:21:35
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8樓2023-05-11 19:45:27
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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懂了，你是把載體酶切之后又用瓊脂糖凝膠電泳觀察到條帶幾乎不可見是吧，那這就要考慮是不是你酶切時(shí)間太久了，導(dǎo)致限制酶亂切，試試減少酶切時(shí)間，或換個(gè)公司的酶，按理說現(xiàn)在市面上的酶已經(jīng)很少需要酶切過夜的了 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
9樓2023-05-12 12:39:05
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我也有過懷疑是否是酶切時(shí)間過長，同時(shí)也懷疑是否產(chǎn)生星號活性，昨晚換了ecroi的buffer，同樣也未改善多少，接下來試一下縮短酶切時(shí)間吧，那我大概酶切多長時(shí)間呢，用的是賽默飛的酶，推薦時(shí)間是1-16小時(shí) 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
10樓2023-05-12 14:58:25
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