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C12ire1新蟲 (初入文壇)
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[求助]
雙酶切求助！ 已有2人參與
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雙酶切后載體條帶很淺 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容是載體和插入片段同時酶切過夜，用的EcoRI和BamHI，片段和載體都是50體系，且都加了500ng,試過把載體加到1000ng，跑出來的條帶是插入片段是亮的，載體條帶很淺，幾乎看不見，測了濃度是載體酶切后在1-2ng/ul,反復(fù)酶切過幾次都是這種結(jié)果，片段是1500bp，載體是改造載體1.6kb求大佬解答！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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C12ire1
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我也有過懷疑是否是酶切時間過長，同時也懷疑是否產(chǎn)生星號活性，昨晚換了ecroi的buffer，同樣也未改善多少，接下來試一下縮短酶切時間吧，那我大概酶切多長時間呢，用的是賽默飛的酶，推薦時間是1-16小時 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
10樓2023-05-12 14:58:25
2樓2023-05-11 10:37:14
3樓2023-05-11 11:53:23
C12ire1
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其實(shí)我后面已經(jīng)重轉(zhuǎn)過了，結(jié)果也是差不多，就是感覺載體有問題，但不知道問題在哪兒，后續(xù)用酶切產(chǎn)物直接回收，沒有跑膠，得到過7-8ng/ul的濃度做了轉(zhuǎn)化，但沒有得到陽性菌 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2023-05-11 16:25:39
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